人骨形成蛋白3在昆虫杆状病毒表达系统中的表达、纯化及其诱骨活性检测

来源 :中国生物化学与分子生物学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:kaizhan
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为了在昆虫杆状病毒系统中表达人骨形成蛋白3(human bone morphogenetic proteoin3,hBMP3),检测表达产物的诱骨活性,将hBMP3全长cDNA1416bp克隆入转移载体K8中,再与病毒DNA经脂质体包裹后转染昆明细胞Sf9,重组病毒经蓝白筛选后,用PCR方法扩增目的基因片段进行初步鉴定,收集重组病毒的转染上清,肝素亲和层析纯化目的蛋白,SDS-PAGE和Western印迹进一步鉴定此蛋白,体外培养MC3T3-E1细胞,经目的蛋白刺激后,检测细胞内碱性磷酸酶(ALP)活性,
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