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【摘 要】 目的：建立前列回春丸中虎杖苷含量测定的方法。方法：Hypersil ODS2 Cl8柱（4.6mm×250mm，5μm）；检测波长：306nm；流动相：乙腈-水（19∶81）；柱温：30℃；流速：1ml/min条件下，采用高效液相色谱法测定虎杖苷的含量。结果：虎杖苷进样量在0.0394～0.4334μg/ml的范围内与峰面积呈良好的线性关系（r=0.9998，n=6），平均回收率为98.85%（RSD=1.08%，n=6）。结论：该方法简便易行、重现性好，可作为前列回春丸质量控制方法。
【关键词】 前列回春丸；虎杖苷；高效液相色谱法
【中图分类号】R284.1 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2015）12-0003-02
前列回春丸（浓缩丸）是在前列回春胶囊[1]的基础上进行剂型改革而进一步开发的新制剂，配方主要由虎杖、淫羊藿、炮山甲等十九味中药组成，具有益肾回春、活血通淋、清热解毒的功效。虎杖苷又名白藜芦醇苷，为虎杖的主要有效成分，具有抗癌、抗菌消炎、抗氧化等生物活性。原胶囊剂标准中没有含量测定项目，本实验采用HPLC法测定前列回春丸中虎杖苷的含量，为该制剂的质量标准制定提供依据。
1 儀器与材料
1.1 仪器 高效液相色谱仪（岛津LC-10AT，检测器SPD-10A，浙大N2000软件）；数控超声波清洗器（KQ-300DE型，昆山市超声仪器有限公司）。
1.2 材料 前列回春丸（规格：每8丸相当于原生药3g，本院制剂中心制备）；虎杖苷对照品（批号：111575-200301，中国药品生物制品检定所）；乙腈为色谱纯；水为重蒸水；其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 Hypersil ODS2 Cl8柱（4.6mm×250mm，5μm）；检测波长：306nm；流动相：乙腈-水（19∶81）；柱温：30℃；流速：1ml/min；灵敏度为0.08 AUFS；理论板数按虎杖苷峰计算不低于3000。避光操作。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液 取经五氧化二磷为干燥剂减压干燥24h的虎杖苷对照品适量，精密称定，加稀乙醇制成17.39μg/ml的溶液，摇匀，即得。
2.2.2 供试品溶液 取本品20丸，研细，取细粉约1.5g，精密称定，置50ml具塞棕色锥形瓶中，精密加入稀乙醇25ml，密塞，精密称定，超声处理（300W，40kHz）30min，放至室温，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液，即得。
2.2.3 阴性对照溶液 按照处方量称取除虎杖外的所有组分制备虎杖阴性对照样品，余同“2.2.2”操作，即得。
2.3 专属性考察 分别取“2.2”项下的对照品、供试品、阴性对照溶液各20μl，在“2.1”项之色谱条件下进样，记录色谱图。从图1可见，虎杖苷色谱峰峰形对称，供试品色谱图中虎杖苷峰能与其它成分很好地分离，阴性对照溶液在虎杖苷峰处基本无干扰。
2.4 线性关系考察 精密称取经五氧化二磷为干燥剂减压干燥24h虎杖苷对照品7.88mg置20ml棕色量瓶中，加稀乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取10ml置100ml棕色量瓶中加稀乙醇至刻度并摇匀，精密吸取1、3、5、7、9、11ml分别置20ml棕色量瓶中，加稀乙醇至刻度并摇匀，精密吸取6种质量浓度的对照品溶液20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。以注入的虎杖苷对照品量为横坐标（μg，X）、峰面积为纵坐标（Y），作图得到标准曲线，回归方程为Y=517999X -568.85，r=0.9998（n=6）。结果，虎杖苷对照品进样量在0.0394～0.4334μg/ml范围内与峰面积呈良好的线性关系。
2.5 精密度试验 精密吸取对照品溶液及供试品溶液分别连续进样6次，每次20μl，峰面积RSD分别为0.98%、1.79%。表明仪器的精密度较好。
2.6 稳定性试验 精密吸取供试品（批号：121101）溶液20μl，分别在0、2、4、8、12、14h测定虎杖苷的峰面积。RSD值为1.91%，表明供试品溶液在14h内基本稳定。
2.7 重复性试验 取前列回春丸（批号：121101）6份，按“2.2”制备溶液，精密吸取溶液20μl注入色谱仪，测定，含量平均值128.00μg/g，RSD值1.30%。
2.8 加样回收率试验 称取前列回春丸（批号：121101）6份，每份20丸，研细，取细粉约0.75g，精密称定，精密加入同一浓度的虎杖苷对照品溶液1ml，余按“2.2”制备成供试品溶液，测定并计算供试品中虎杖苷的回收率，结果见表1。
2.9 供试品含量测定 取3批供试品（批号：121101、121102、121103），分别按“2.2”制备供试品溶液，分别精密吸取各供试品溶液20μl，注入色谱仪，测定，结果虎杖苷含量分别为128.00、128.92、127.17μg/g。
3 讨论
据文献报道[2-5]，供试液制备中所用的溶剂有甲醇与稀乙醇，虽然用甲醇时其他峰相对小及少些，但从环保考虑，在分离度能达到要求的前提下选取稀乙醇为佳。检测波长及流动相的选择参考文献[2，4]选定检测波长：306nm，流动相：乙腈-水。本制剂为复方制剂，化学成分较多，通过调整，采用乙腈-水（19∶81）为流动相时，虎杖苷与其他成分能达到有效分离，分离度较好，色谱系统稳定。方法学研究表明，用HPLC法测定前列回春浓缩丸中虎杖苷的含量，操作方便，专属性强，可作为前列回春浓缩丸的质量控制方法。
参考文献
[1] 中华人民共和国卫生部.卫生部药品标准中药成方制剂第17册[S].北京：人民卫生出版社，1998：175.
[2] 中华人民共和国卫生部药典委员会.中国药典（一部）[S].北京：中国医药科技出版社，2010：194-195.
[3] 柯长青，蒋永海.高效液相色谱法测定金胆片中虎杖苷含量[J].中国药业，2006，15（13）：33-34.
[4] 彭绍冲，李耿，蔡大可，等.高效液相色谱法测定痹痛消膏中虎杖苷的含量[J].药物分析杂志，2007，27（11）：1725-1727.
[5] 杨海燕，张成.高效液相法测定朱砂七中虎杖苷含量[J].中国药业，2011，20（10）：29-30.
（收稿日期：2015.04.19）
【关键词】 前列回春丸；虎杖苷；高效液相色谱法
【中图分类号】R284.1 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2015）12-0003-02
前列回春丸（浓缩丸）是在前列回春胶囊[1]的基础上进行剂型改革而进一步开发的新制剂，配方主要由虎杖、淫羊藿、炮山甲等十九味中药组成，具有益肾回春、活血通淋、清热解毒的功效。虎杖苷又名白藜芦醇苷，为虎杖的主要有效成分，具有抗癌、抗菌消炎、抗氧化等生物活性。原胶囊剂标准中没有含量测定项目，本实验采用HPLC法测定前列回春丸中虎杖苷的含量，为该制剂的质量标准制定提供依据。
1 儀器与材料
1.1 仪器 高效液相色谱仪（岛津LC-10AT，检测器SPD-10A，浙大N2000软件）；数控超声波清洗器（KQ-300DE型，昆山市超声仪器有限公司）。
1.2 材料 前列回春丸（规格：每8丸相当于原生药3g，本院制剂中心制备）；虎杖苷对照品（批号：111575-200301，中国药品生物制品检定所）；乙腈为色谱纯；水为重蒸水；其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 Hypersil ODS2 Cl8柱（4.6mm×250mm，5μm）；检测波长：306nm；流动相：乙腈-水（19∶81）；柱温：30℃；流速：1ml/min；灵敏度为0.08 AUFS；理论板数按虎杖苷峰计算不低于3000。避光操作。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液 取经五氧化二磷为干燥剂减压干燥24h的虎杖苷对照品适量，精密称定，加稀乙醇制成17.39μg/ml的溶液，摇匀，即得。
2.2.2 供试品溶液 取本品20丸，研细，取细粉约1.5g，精密称定，置50ml具塞棕色锥形瓶中，精密加入稀乙醇25ml，密塞，精密称定，超声处理（300W，40kHz）30min，放至室温，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液，即得。
2.2.3 阴性对照溶液 按照处方量称取除虎杖外的所有组分制备虎杖阴性对照样品，余同“2.2.2”操作，即得。
2.3 专属性考察 分别取“2.2”项下的对照品、供试品、阴性对照溶液各20μl，在“2.1”项之色谱条件下进样，记录色谱图。从图1可见，虎杖苷色谱峰峰形对称，供试品色谱图中虎杖苷峰能与其它成分很好地分离，阴性对照溶液在虎杖苷峰处基本无干扰。
2.4 线性关系考察 精密称取经五氧化二磷为干燥剂减压干燥24h虎杖苷对照品7.88mg置20ml棕色量瓶中，加稀乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取10ml置100ml棕色量瓶中加稀乙醇至刻度并摇匀，精密吸取1、3、5、7、9、11ml分别置20ml棕色量瓶中，加稀乙醇至刻度并摇匀，精密吸取6种质量浓度的对照品溶液20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。以注入的虎杖苷对照品量为横坐标（μg，X）、峰面积为纵坐标（Y），作图得到标准曲线，回归方程为Y=517999X -568.85，r=0.9998（n=6）。结果，虎杖苷对照品进样量在0.0394～0.4334μg/ml范围内与峰面积呈良好的线性关系。
2.5 精密度试验 精密吸取对照品溶液及供试品溶液分别连续进样6次，每次20μl，峰面积RSD分别为0.98%、1.79%。表明仪器的精密度较好。
2.6 稳定性试验 精密吸取供试品（批号：121101）溶液20μl，分别在0、2、4、8、12、14h测定虎杖苷的峰面积。RSD值为1.91%，表明供试品溶液在14h内基本稳定。
2.7 重复性试验 取前列回春丸（批号：121101）6份，按“2.2”制备溶液，精密吸取溶液20μl注入色谱仪，测定，含量平均值128.00μg/g，RSD值1.30%。
2.8 加样回收率试验 称取前列回春丸（批号：121101）6份，每份20丸，研细，取细粉约0.75g，精密称定，精密加入同一浓度的虎杖苷对照品溶液1ml，余按“2.2”制备成供试品溶液，测定并计算供试品中虎杖苷的回收率，结果见表1。
2.9 供试品含量测定 取3批供试品（批号：121101、121102、121103），分别按“2.2”制备供试品溶液，分别精密吸取各供试品溶液20μl，注入色谱仪，测定，结果虎杖苷含量分别为128.00、128.92、127.17μg/g。
3 讨论
据文献报道[2-5]，供试液制备中所用的溶剂有甲醇与稀乙醇，虽然用甲醇时其他峰相对小及少些，但从环保考虑，在分离度能达到要求的前提下选取稀乙醇为佳。检测波长及流动相的选择参考文献[2，4]选定检测波长：306nm，流动相：乙腈-水。本制剂为复方制剂，化学成分较多，通过调整，采用乙腈-水（19∶81）为流动相时，虎杖苷与其他成分能达到有效分离，分离度较好，色谱系统稳定。方法学研究表明，用HPLC法测定前列回春浓缩丸中虎杖苷的含量，操作方便，专属性强，可作为前列回春浓缩丸的质量控制方法。
参考文献
[1] 中华人民共和国卫生部.卫生部药品标准中药成方制剂第17册[S].北京：人民卫生出版社，1998：175.
[2] 中华人民共和国卫生部药典委员会.中国药典（一部）[S].北京：中国医药科技出版社，2010：194-195.
[3] 柯长青，蒋永海.高效液相色谱法测定金胆片中虎杖苷含量[J].中国药业，2006，15（13）：33-34.
[4] 彭绍冲，李耿，蔡大可，等.高效液相色谱法测定痹痛消膏中虎杖苷的含量[J].药物分析杂志，2007，27（11）：1725-1727.
[5] 杨海燕，张成.高效液相法测定朱砂七中虎杖苷含量[J].中国药业，2011，20（10）：29-30.
（收稿日期：2015.04.19）