【摘 要】
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目的探讨神经营养因子受体C(TrkC)单纯转染及TrkC和神经营养因子-3(NT-3)联合作用对乳腺癌细胞T47D生物学特性的影响及其机制。方法在乳腺癌细胞株中筛选出不表达TrkC的T47D;以重组腺病毒Ad-TrkC转染T47D,流式细胞术和免疫荧光化学染色分析和鉴定转染效果;噻唑蓝比色法(MTT法)、平板集落形成、流式细胞仪检测癌细胞增殖与存活能力;划痕实验检测癌细胞迁移能力;Transwel
【机 构】
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300060天津医科大学肿瘤医院乳腺病理研究室国家肿瘤临床医学研究中心乳腺癌防治教育部重点实验室天津市肿瘤防治重点实验室,300060天津医科大学肿瘤医院乳腺病理研究室国家肿瘤临床医学研究中心乳腺癌防
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目的探讨神经营养因子受体C(TrkC)单纯转染及TrkC和神经营养因子-3(NT-3)联合作用对乳腺癌细胞T47D生物学特性的影响及其机制。
方法在乳腺癌细胞株中筛选出不表达TrkC的T47D;以重组腺病毒Ad-TrkC转染T47D,流式细胞术和免疫荧光化学染色分析和鉴定转染效果;噻唑蓝比色法(MTT法)、平板集落形成、流式细胞仪检测癌细胞增殖与存活能力;划痕实验检测癌细胞迁移能力;Transwell和Matrigel胶检测癌细胞侵袭能力;Western blot检测相关信号分子的表达。
结果感染复数(MOI)= 20重组腺病毒可成功转染T47D,转染效率达到96.7%,并使T47D成功表达TrkC;单纯TrkC转染可明显降低T47D癌细胞存活数和平板集落形成率(12.0%比35.2%,P< 0.05),诱导癌细胞发生G2/M期阻滞,机制与癌细胞发生早期凋亡(55.5% 比2.2%)和促进含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)表达有关。而TrkC和NT-3的联合作用则诱导完全不同的生物学效应:促进细胞存活和平板集落形成率(84.8%,P< 0.05)、促进细胞进入S期和G2/M期,减少细胞早期凋亡(1.8%)和死亡(P< 0.05);机制与激活磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路有关,同时还能促进T47D的迁移和侵袭能力。
结论TrkC可能以依赖性受体方式调控T47D乳腺癌细胞的增殖、存活和侵袭。
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