探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)对人肾小管上皮细胞株HK-2中N-myc下游调节基因2(NDRG2)表达的影响。
方法按照是否孵育TGF-β1分别设置对照组和实验组,取两组细胞分别提取蛋白及RNA行Western blot及实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR),检验两组上皮细胞E-钙黏蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(Vimentin)和Snail蛋白的表达差异。然后根据孵育TGF-β1的不同浓度梯度设置不同组别,分别取各组细胞提取蛋白及RNA行Western blot及RT-qPCR以检验NDRG2在TGF-β1作用后的人肾小管上皮细胞(HK-2)中的表达。
结果结果表明对照组和实验组在蛋白水平相关表达量分别为E-cadherin(1.0±0.2比0.3±0.2)(t=4.850, P=0.008),α-SMA(1.0±0.1比2.6±0.4)(t=6.721, P=0.003),Vimentin(1.0±0.1比2.6±0.4)(t=6.721, P=0.003),Snail(1.0±0.1比2.5±0.2)(t=11.620, P=0.000),以上标志物两组之间差异均有统计学意义。对照组和实验组在mRNA水平相关表达量分别为E-cadherin(1.0±0.2比0.2±0.1)(t=7.686, P=0.002),α-SMA(1.0±0.3比2.4±0.3)(t=5.715, P=0.005),Vimentin(1.1±0.2比2.6±0.5)(t=4.977, P=0.008),Snail(0.9±0.2比1.9±0.2)(t=6.124, P=0.004),以上标志物两组之间差异均有统计学意义。同时在TGF-β1孵育后,HK-2细胞中NDRG2在蛋白和RNA水平都明显下调,各组在蛋白水平相关表达量分别为1.00±0.04比0.80±0.03比0.50±0.05比0.30±0.03比0.20±0.02(P=0.019),在mRNA水平相关表达量分别为1.00±0.05比0.70±0.03比0.50±0.04比0.30±0.02比0.20±0.05(P=0.021)。尤其当孵育TGF-β1浓度大于10 ng/ml时这种作用最为显著,各组表达水平之间差异有统计学意义。
结论TGF-β1可以促进HK-2细胞中上皮-间充质转化(EMT)过程,同时TGF-β1可以下调HK-2细胞中NDRG2在蛋白和RNA水平的表达量。