【摘 要】
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目的 优化线粒体DNA(mtDNA)提取和纯度鉴定方法以满足线粒体基因组测序的要求.方法 利用简化的蔗糖密度梯度离心法、DNA酶Ⅰ并结合质粒提取试剂盒提取纯化mtDNA、尽量降低核DNA(nDNA)污染的可能.获得的mtDNA经NanoDrop检测、琼脂糖凝胶电泳和荧光定量PCR绝对定量法测定nDNA/mtDNA拷贝数比值等鉴定其纯度.结果 从小鼠肝脏和大脑组织中提取纯化得到mtDNA产率分别为311.7μg/g和59.1μg/g,其A260/280均介于1.8～2.0,A260/230浓度均大于2.0,
【机 构】
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浙江省温州市人民医院医学检验中心,浙江温州 325000;温州医科大学检验医学院(生命科学学院),浙江温州 325035
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目的 优化线粒体DNA(mtDNA)提取和纯度鉴定方法以满足线粒体基因组测序的要求.方法 利用简化的蔗糖密度梯度离心法、DNA酶Ⅰ并结合质粒提取试剂盒提取纯化mtDNA、尽量降低核DNA(nDNA)污染的可能.获得的mtDNA经NanoDrop检测、琼脂糖凝胶电泳和荧光定量PCR绝对定量法测定nDNA/mtDNA拷贝数比值等鉴定其纯度.结果 从小鼠肝脏和大脑组织中提取纯化得到mtDNA产率分别为311.7μg/g和59.1μg/g,其A260/280均介于1.8～2.0,A260/230浓度均大于2.0,荧光定量PCR绝对定量法测定nDNA/mtDNA拷贝数比值均低于0.005％.结论 本研究优化了mtDNA提取和鉴定方法,得到的高纯度mtDNA适用于后续线粒体基因组测序等分子生物学研究.
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