【摘 要】
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目的构建携带双自杀基因且可诱导敲除SV40T的逆转录病毒载体，优化目前的肝细胞永生化。方法去除eGFP终止子taa的pSEB-HUS质粒为逆转录病毒基础质粒。先将SV40T及其启动子hEFH
【机 构】
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重庆医科大学临床检验诊断系,重庆医科大学生物化学与分子生物学教研室
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目的构建携带双自杀基因且可诱导敲除SV40T的逆转录病毒载体，优化目前的肝细胞永生化。方法去除eGFP终止子taa的pSEB-HUS质粒为逆转录病毒基础质粒。先将SV40T及其启动子hEFH亚克隆至pSEB-HUS，再将LoxP位点插入至pSEB—SV40T质粒的抗性基因Blasticidin上游获得pSEB—LoxP—SV40T质粒。同时将CD自杀基因定向克隆至pSEB—HUS的eGFP下游；然后设计一段HSV—tk自杀基因引物，在上游引物的5’端加入方向一致的LoxP序列。PCR获得TK基因后，定向克
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