【摘 要】
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本研究旨在克隆通城猪含有第1个内含子的MSTN前肽基因,构建真核定点诱变载体,并通过转染C2C12细胞验证载体表达的有效性。以通城猪血液样品中提取的DNA作为模板,PCR扩增得到
【机 构】
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中国农业科学院北京畜牧兽医研究所畜禽遗传资源与利用农业部重点开放实验室,华中农业大学动物医学院
【基金项目】
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中国农业科学院北京畜牧兽医研究所青年科学基金（YWF-QN-2）, 国家自然科学基金（30700569）, 国家863计划（2006AA10Z135）资助
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本研究旨在克隆通城猪含有第1个内含子的MSTN前肽基因,构建真核定点诱变载体,并通过转染C2C12细胞验证载体表达的有效性。以通城猪血液样品中提取的DNA作为模板,PCR扩增得到含第1个内含子的MSTN前肽基因,扩增产物进行克隆、测序。再将目的片段定向克隆到去除了EGFP基因的pEGFP-N1表达载体上。通过定点诱变方法将前肽编码序列第76位天冬氨酸突变为丙氨酸,获得定点诱变载体pEGFP（-）-N1-ProMstnD76A,并瞬时转染C2C12细胞。转染48 h后,通过RT-PCR和Real-time
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