【摘 要】
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为建立猪囊孢球虫和毕氏肠微孢子虫双重nest-PCR快速检测方法,参考文献引物,合成针对猪囊孢球虫SSU rRNA、毕氏肠微孢子虫ITS位点的特异性序列,优化双重nest-PCR反应中的引物
【机 构】
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河南农业大学牧医工程学院,河南郑州450046
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为建立猪囊孢球虫和毕氏肠微孢子虫双重nest-PCR快速检测方法,参考文献引物,合成针对猪囊孢球虫SSU rRNA、毕氏肠微孢子虫ITS位点的特异性序列,优化双重nest-PCR反应中的引物比、退火温度和循环数等各项反应条件,建立快速检测2种肠道原虫的双重nest-PCR方法.针对该方法的特异性、敏感性和重复性进行检验.结果表明,猪囊孢球虫、毕氏肠微孢子虫最低可检测DNA量分别为209×10-6和527×10-9 mg/L;特异性和重复性良好.用建立的双重nest-PCR方法对48份猪粪样DNA进行检测,用单病原检测nest-PCR扩增猪囊孢球虫和毕氏肠微孢子虫,阳性率分别为12.50％(6/48)和22.92％(11/48),混合感染阳性率为4.17％(2/48);双重nest-PCR猪囊孢球虫和毕氏肠微孢子虫的阳性率分别为8.33％(4/48)和20.83％(10/48),混合感染阳性率为4.17％(2/48);单重nest-PCR和双重nest-PCR检测结果无统计学差异(P＞0.05).表明该方法可用于猪肠道2种原虫流行病学调查和临床检测.
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