论文部分内容阅读
目的 优化并建立CCP/AST分泌干扰素γ(IFN-γ)与白细胞介素4(IL-4)的ELISpot方法,以探讨CCP/AST细胞在RA发生、发展中的作用与临床意义.方法 以CCP抗原肽为特异性刺激物,FLAG肽为对照,用ELISpot检测64例RA患者和64例非RA患者及30名健康人PBMC分泌IFN-γ、IL-4的阳性SFC频数与比值,并评估其在RA疾病中的诊断价值,同时对上述3项指标与RA患者的关节症状及其他指标间的相关性进行分析.结果 RA患者中特异性分泌IFN-γ和IL-4-的SFC分别为39(12～77)个/3×105PBMC和1(1～3)个/3×105PBMC,阳性率分别为81.3%和18.8%;IFN-γ与IL-4的SFC频数比值为15(5～39),阳性率78.1%.其中IFN-γ的SFC和两者频数比值均显著高于非RA疾病(Z分别为-7.458、-7.019,P均＜0.01)和健康对照组(Z分别为-6.643、-5.760,P均＜0.01),且这2项指标在抗CCP抗体阳性与阴性的RA组中均显著高于系统性红斑狼疮(Z分别为-6.573、-6.098、-4.552、-4.726,P均＜0.01)、强直性脊柱炎(Z分别为-3.520、-3.326、-2.950、-2.126,P均＜0.01或0.05)、其他自身免疫病(Z分别为-4.838、-4.418、-3.681、-3.839,P均＜0.01)和健康对照组(Z分别为-6.553、-5.578、-4.635、-4.163,P均＜0.01).用IFN-γ-SFC、IL-4-SFC和IFN-γ-SFC/IL-4-SFC频数比值3项指标联合检测RA的ROC曲线下面积和Youden指数分别为0.910和0.747,其诊断RA的敏感度和特异度分别为87.5%和87.2%,阳性和阴性预测值分别为82.4%和91.1%.相关分析结果显示,IFN-γ-SFC/IL-4-SFC频数比值不仅与抗CCP水平显著相关(r=0.393,P＜0.01),而且与患者的关节症状,如肿痛关节数(r=0.429,P＜0.01)、破坏关节数(r=0.463,P＜0.01)、RF(r=0.166,P＜0.01)及ESR(r=0.199,P＜0.05)亦显著相关.结论 RA患者体内广泛存在CCP/AST的活化和异常,并呈CCP抗原特异性Th1细胞优势状态,这为客观了解RA瓜氨酸化蛋白介导的特异性细胞免疫应答状态及细胞因子网络调节功能提供了新的试验依据,并具有潜在诊断和临床应用价值.