【摘 要】
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目的构建巨细胞病毒（CMV）启动子驱动的单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）真核表达载体,转染人胚肾HEK293T细胞,验证其对巨噬细胞的趋化作用。方法小鼠基因组DNA作模板,用PCR法获得MCP-1启
【机 构】
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第四军医大学附属西京医院肾脏内科; 第四军医大学基础部医学遗传与发育生物学教研室;
【基金项目】
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国家自然科学基金(81370811)
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目的构建巨细胞病毒（CMV）启动子驱动的单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）真核表达载体,转染人胚肾HEK293T细胞,验证其对巨噬细胞的趋化作用。方法小鼠基因组DNA作模板,用PCR法获得MCP-1启动子区基因片段,插入p FLAGCMV1载体。用双酶切法和测序鉴定正确后,将构建好的病毒载体转染HEK293T细胞,用Western blot法检测MCP-1的表达,用TranswellTM实验检测转染后细胞分泌的MCP-1对巨噬细胞的趋化作用。结果重组载体酶切鉴定在相应位置有目的片段,转染单核细胞趋化因子重组载体后的HEK293T细胞有MCP-1表达,转染后HEK293T细胞分泌的MCP-1明显增加巨噬细胞的迁移。结论HEK293T细胞表达的MCP-1明显增强巨噬细胞的迁移。
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