研究碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌中耐药结节细胞分化超家族(RND)外排泵介导菌株对替加环素敏感性降低的机制。
方法连续收集2010年7个省市16家医院鲍曼不动杆菌631株。采用PCR检测oxa-51和oxa-23基因，并对菌株进行多位点序列分型(MLST)。用纸片药敏法检测β-内酰胺类、氨基糖苷类、大环内酯类、四环素类、碳青霉烯类抗生素、替加环素和多黏菌素的抑菌圈直径。对替加环素抑菌圈直径≤12 mm的菌株采用E-test法检测替加环素最小抑菌浓度(MIC)。使用外排泵抑制剂1-(1-萘甲基)哌嗪(NMP)检测操纵子基因中adeB、adeG和adeJ的表达，确定外排泵抑制剂抑制表型的分布。选取对替加环素和碳青霉烯类均耐药，且具有外排泵抑制剂抑制表型的菌株作为实验组；对替加环素敏感而对碳青霉烯类耐药的菌株作为对照组，并以对替加环素敏感的ATCC19606菌株作为标准菌株。采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测实验组和对照组外排泵adeABC、adeFGH和adeIJK的转录水平并进行比较。采用PCR法对adeR、adeS和adeL进行全基因长度测序，查找突变位点或插入序列。
结果631株鲍曼不动杆菌中，共筛选出32株对替加环素敏感性降低的碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌，其中8株具有外排泵抑制剂抑制表型。同时选取对替加环素敏感而对碳青霉烯类耐药的4株作为对照组。实验组A518、Z1219和A527菌株adeABC表达明显增高，分别是标准株ATCC19606的13，5和7倍；adeFGH和adeIJK表达量在部分菌株中稍有上调。对照组A207和A1731菌株在转录水平未检测到adeABC，其他菌株adeABC、adeFGH和adeIJK表达没有上调。在adeR和adeS分别发现多态性位点E220K和A130D。在adeABC高表达菌株中发现了adeS的ISAba1插入突变。adeL中未发现突变位点。
结论adeABC高表达在碳青霉烯类耐药鲍曼不动杆菌替加环素耐药机制中发挥重要作用，主要是调控基因adeS中存在ISAba1插入突变导致adeABC高表达所致，但不排除其他替加环素耐药机制的存在。