【摘 要】
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采用相对和绝对定量同位素标签(iTRAQ)对蛋白质进行鉴定和比较定量,其能进一步比较更为复杂样品的蛋白质表达水平.将蛋白质样品用胰蛋白酶酶解,分别被几种分子量相等的iTRAQ
【机 构】
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广西大学亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室/广西大学生命科学与技术学院
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采用相对和绝对定量同位素标签(iTRAQ)对蛋白质进行鉴定和比较定量,其能进一步比较更为复杂样品的蛋白质表达水平.将蛋白质样品用胰蛋白酶酶解,分别被几种分子量相等的iTRAQ标签中的一种标记,然后混合.混合后将被标记的多肽通过强阳离子交换色谱(SCx)和纳升反相色谱(RP)分离,结合质谱(MS)分析.结果表明,在保证95％的置信度下,共有54个唯一肽段和6个标准蛋白质被成功鉴定,包括大肠杆菌的β-半乳糖苷酶、β-乳球蛋白、小鸡溶菌酶,人血清铁传递蛋白的蛋白质定量表达水平在样品A和样品B中未表现出显著差异,但样品B中牛血清白蛋白(BSA)和α-乳白蛋白的数量均为样品A的一半.该结果与预期试验结果相符,且重复性好,表明此方法具有稳定性和可重复性,适用于蛋白质鉴定和表达水平的比较定量研究,此外,其能显著提高蛋白质混合物的研究通量.
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