人缺失型Midkine重组蛋白的原核表达及活性鉴定

来源 :徐州医学院学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户：heheaixixi

【摘要】

：

目的构建人缺失型Midkine（tMK）的原核表达载体，以得到具有生物学活性的重组蛋白。方法从测序正确的pMD18-T-trekVector重组质粒上切下tmk序列，重组至pET30（a＋）载体中，转化BL21（DE3），IPTG

【作者】

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张鹏王庆苓

【机构】

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徐州医学院病理学教研室,徐州医学院病原生物学与免疫学教研室

【出处】

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徐州医学院学报

【发表日期】

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2012年10期

【关键词】

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缺失型Midkine 载体构建蛋白纯化细胞增殖 truncated midkine vector construction protein purifi

【基金项目】

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国家自然科学基金（81101493）,徐州医学院院长人才专项基金（09KJZ12）,徐州医学院课题（11KJ07）

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目的构建人缺失型Midkine（tMK）的原核表达载体，以得到具有生物学活性的重组蛋白。方法从测序正确的pMD18-T-trekVector重组质粒上切下tmk序列，重组至pET30（a＋）载体中，转化BL21（DE3），IPTG诱导蛋白表达，HeparinSepharose4B纯化蛋白，CCK-8检测其促NIH3T3和BGC823细胞增殖的活性。结果成功构建了tMK的原核表达载体，纯化得到重组tMK蛋白。该蛋白在0．03125-0．5mg／L范围时能明显促进NIH3T3细胞增殖（P〈0．05或P〈0．0

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