【摘 要】
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目的:明确L-Wnt3a条件培养基的收集方案并标定Wnt3a蛋白浓度，验证其作为多能干细胞向黑素细胞分化体系中Wnt3a来源的作用。方法:通过观察L-Wnt3a细胞的生长特性及其分泌Wnt3a蛋白量特点，设定收集条件培养基的参数，使用ELISA法对收集到的条件培养基进行Wnt3a蛋白浓度的标定，配制出明确Wnt3a浓度的黑素细胞分化培养基，对胚胎干细胞株WA09及诱导多能干细胞株WTC-11细胞进
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目（81770621）；
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目的:明确L-Wnt3a条件培养基的收集方案并标定Wnt3a蛋白浓度，验证其作为多能干细胞向黑素细胞分化体系中Wnt3a来源的作用。方法:通过观察L-Wnt3a细胞的生长特性及其分泌Wnt3a蛋白量特点，设定收集条件培养基的参数，使用ELISA法对收集到的条件培养基进行Wnt3a蛋白浓度的标定，配制出明确Wnt3a浓度的黑素细胞分化培养基，对胚胎干细胞株WA09及诱导多能干细胞株WTC-11细胞进行黑素细胞的悬浮诱导分化，对获得的诱导黑素细胞进行黑素相关基因表达检测及Masson-Fontana染色等相关验证。结果:优化后的L-Wnt3a条件培养基收集体系能够稳定高效获取Wnt3a蛋白，明确Wnt3a浓度的分化体系能够使WA09和WTC-11成功诱导黑素细胞，使用相应浓度的Wnt3a重组蛋白也能够达到相似的效果。结论:通过优化收集方案能够高效获得明确浓度的L-Wnt3a条件培养基，将其应用于明确Wnt3a浓度的培养体系能够成功诱导多能干细胞分化为功能性黑素细胞。
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