观察嗅鞘细胞(OECs)移植对脊髓挫伤后急性期损伤区巨噬细胞向M2亚型极化的调控作用,探讨OECs移植促进脊髓损伤修复的机制。
方法分离培养原代OECs,移植备用。暴露SD大鼠T10脊髓,并用NYU-Ⅱ撞击机将撞击棒(10 g)从25 mm高处垂直落下挫伤脊髓。伤后即刻将24只脊髓挫伤模型大鼠按随机数字表法分为对照组和OECs移植组,每组12只,分别将DMEM/F12培养基或OECs悬液(浓度3×104个/μL,1 μL×3次)注入损伤脊髓处。伤后1~9周时每周采用BBB评分法对大鼠进行运动功能评分。伤后1周时采用免疫荧光染色标记并计数损伤区M2型巨噬细胞及髓鞘相关抑制因子Nogo-A阳性细胞,同时采用Western blotting检测炎症因子白介素(IL)-4、IL-6蛋白的表达。伤后9周时采用HE染色观察损伤脊髓的病理改变。
结果伤后1~9周时,OECs移植组每周BBB评分均明显高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。伤后1周时,OECs移植组M2型巨噬细胞数量明显高于对照组(3.24%±0.56% vs. 0.63%±0.21%),Nogo-A阳性细胞数量、荧光强度均明显低于对照组[(43±24)个/视野vs. (207±88)个/视野;0.042±0.006 vs. 0.062±0.011],抗炎因子IL-4蛋白表达量明显高于对照组(0.717±0.152 vs. 0.183±0.063),促炎因子IL-6蛋白表达量明显低于对照组(0.550±0.124 vs. 1.060±0.209),差异均有统计学意义(P<0.05)。伤后9周时,HE染色显示OECs移植组囊性空洞面积[(1.511±0.581) mm2]较对照组[(2.939±0.823) mm2]明显减小,差异有统计学意义(P<0.05)。
结论OECs移植可促进脊髓损伤区巨噬细胞向M2亚型极化,并改善炎症微环境、抑制Nogo-A表达,从而促进脊髓结构和功能的恢复。