目的:建立简单快速的高效液相色谱-串联三重四极杆质谱法测定维生素D/AD滴剂（软胶囊）中维生素D3含量。方法:取制剂内容物适量，直接用正己烷稀释至合适浓度后进行检测；采用Agilent Zorbax Rx-Sil（100 mm×3.0 mm, 1.8μm）色谱柱，流动相为正己烷-正戊醇（997∶3）,流速1 mL·min-1,柱温35℃,大气压化学电离（APCI）源，MRM模式，m/z 385.3→259.1（+）（定量离子）,流路0～5 min切废液，5 min后进质谱。结果:前维生素D3与维生素D3在质谱检测中有相同的响应因子，可直接合并峰面积进行含量计算；维生素D3总量的线性范围0.01～0.5μg·mL-1,r=0.999 5;4种维生素D/AD滴剂（软胶囊）样品中维生素D3平均回收率（n=9）在100.5%～102.3%。对4种维生素D/AD滴剂（软胶囊）进行多批次测定，有效期内的制剂样品中的维生素D3均达到标示量的90.0%～105.0%。结论:本法经方法学验证，适用于维生素D/AD滴剂（软胶囊）中的维生素D3含量测定，无需任何前处理步骤，无需测定前维生素D3的相对校正因子，操作简便、快速准确，为其他油溶性维生素D3制剂的含量检测提供参考。