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目的
建立微囊藻基因实时荧光定量聚合酶链式反应检测方法,实现微囊藻毒素预警性监测。
方法针对微囊藻毒素合成酶基Mcy A、Mcy D和微囊藻特异性的16S rDNA部分核苷酸序列设计合成引物,将扩增获得的目的基因与pMD®18-T Vector连接制备微囊藻毒素合成酶系编码基因重组质粒标准品,确定检测体系主要参数,构建标准曲线,并据此计算待测水样微囊藻毒素合成酶基因的拷贝数。
结果初始模板量的对数值与Ct值呈良好的线性关系,相关系数r2均达0.995以上,重复性较好。
结论所建立的微囊藻基因荧光定量PCR检测方法,准确度高,灵敏度好,抗干扰性好,实用性强,可用于水源中产毒微囊藻的预测性检测。