【摘 要】
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目的:通过实验探究miR-142靶向高迁移率族蛋白1(high-mobility group box 1 protein,HMGB1)对宫颈癌(cervical cancer,CC)细胞生物学行为的影响及其潜在的作用机制.方法:采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)和蛋白质免疫印迹法(Western Blot)检测CC组织和正常组织中miR-142和HMGB1 mRNA及蛋白表达水平,采用荧光素酶报告实验分析miR-142与HMGB1的靶向关系,CCK-8法检测CC细胞生存能力,克隆形成实验检测CC细胞增
【机 构】
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武汉大学附属同仁医院光谷院区光谷妇科 湖北武汉430074;湖南中医药大学中西医结合妇产科教研室 湖南长沙410208
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目的:通过实验探究miR-142靶向高迁移率族蛋白1(high-mobility group box 1 protein,HMGB1)对宫颈癌(cervical cancer,CC)细胞生物学行为的影响及其潜在的作用机制.方法:采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)和蛋白质免疫印迹法(Western Blot)检测CC组织和正常组织中miR-142和HMGB1 mRNA及蛋白表达水平,采用荧光素酶报告实验分析miR-142与HMGB1的靶向关系,CCK-8法检测CC细胞生存能力,克隆形成实验检测CC细胞增殖能力,划痕修复实验检测CC细胞迁移能力,基质胶侵袭实验检测CC细胞侵袭能力.结果:CC组miR-142 mRNA和蛋白表达水平显著低于正常组(P<0.05),HMGB1 mRNA和蛋白表达水平显著高于正常组(P<0.05),且CC癌组织中miR-142和HMGB1 mRNA和蛋白表达水平均呈显著负相关(r=-0.399,P=0.002;r=-0.429,P=0.001);miR-142与HMGB1存在靶向关系;CCK-8法实验、克隆形成实验、划痕修复实验和基质胶侵袭实验结果显示,miR-142 mimic组细胞生存、增殖、迁移和侵袭能力显著低于miR-NC组(P<0.05),miR-142 inhibitor组细胞生存、增殖、迁移和侵袭能力显著高于miR-NC组;Western Blot实验结果显示,HMGB1过表达时miR-142 mimic+plasmid组HMGB1蛋白表达水平显著高于miR-142 mimic+control plasmid组(P<0.05),显著低于miR-NC+plasmid组(P<0.05);CCK-8法实验、克隆形成实验、划痕修复实验和基质胶侵袭实验结果显示,HMGB1过表达时miR-142 mimic+plasmid组细胞生存、增殖、迁移和侵袭能力显著高于miR-142 mimic+control plasmid组(P<0.05),显著低于miR-NC+plasmid组(P<0.05).结论:miR-142可通过靶向负调控HMGB1表达,进而抑制CC细胞生存、增殖、迁移和侵袭.
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