背景:胎肝细胞可能具有比骨髓干细胞等更强的增殖分化能力和更低的免疫原性,但目前涉及胎肝干细胞直接分离、培养的报道甚少。目的:拟在体外分离培养小鼠胎肝干细胞,并对其生物学特性进行初步鉴定。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2008-03/06在重庆市神经病学重点实验室完成。材料:SPF级13.5d龄昆明种胎鼠9只,由重庆医科大学实验动物中心提供。方法:采用胶原酶+EDTA联合消化法与差速贴壁法体外分离胎鼠肝干细胞,按2×108L-1接种,待细胞80%~90%汇合后消化传代。采用链霉亲和素-生物素-过氧化酶复合物技术对原代接种后5d的贴壁细胞进行多种肝干细胞表面标志物的标记。主要观察指标:原代胎肝干细胞形态变化,胎肝干细胞的传代扩增情况,胎肝干细胞表面标志的表达。结果:原代培养24h细胞贴壁,呈致密圆形,边缘清楚;3d左右部分细胞呈梭形,7d后细胞铺展呈上皮样;传代后细胞扩增速度无明显变化,至第5代仍保持较均一的上皮细胞状。原代接种后5d的贴壁细胞,人干细胞因子受体与甲胎蛋白呈阳性表达,白蛋白与细胞角蛋白19呈阴性。结论:胎肝干细胞原代培养早期表达甲胎蛋白与人干细胞因子受体,不表达白蛋白和细胞角蛋白19,提示所分离的胎肝干细胞可能是一种较原始的干细胞,尚处在未分化的早期阶段。