【摘 要】
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目的:探讨FoxO4是否通过调控自噬影响小鼠神经干细胞(NSCs)的分化能力,寻找调控NSCs分化潜能的有效途径.方法:利用新生BALB/c小鼠提取海马齿状回(DG) NSCs,通过real time RT-PCR和Western Blot实验检测NSCs在分化前后自噬相关基因以及转录因子Forkhead Box O家族(FoxO3、FoxO4和FoxO6)的表达水平;运用基因沉默技术,将电转染后的NSCs分为NC-siRNA组和FoxO4-siRNA组,检测两组NSCs FoxO4 mRNA及蛋白的表达
【机 构】
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山西医科大学基础医学院人体解剖学教研室,太原030001;大同大学医学院基础医学系,大同037000;山西医科大学汾阳学院,汾阳032200
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目的:探讨FoxO4是否通过调控自噬影响小鼠神经干细胞(NSCs)的分化能力,寻找调控NSCs分化潜能的有效途径.方法:利用新生BALB/c小鼠提取海马齿状回(DG) NSCs,通过real time RT-PCR和Western Blot实验检测NSCs在分化前后自噬相关基因以及转录因子Forkhead Box O家族(FoxO3、FoxO4和FoxO6)的表达水平;运用基因沉默技术,将电转染后的NSCs分为NC-siRNA组和FoxO4-siRNA组,检测两组NSCs FoxO4 mRNA及蛋白的表达水平,从而验证已转入siRNA序列的目的基因沉默效率;通过real time RT-PCR和Western Blot实验检测NC-siRNA组和FoxO4-siRNA组NSCs自噬相关基因的表达;进一步将两组NSCs分化培养后通过real time RT-PCR实验以及免疫荧光染色检测Tuj1的表达.结果:体外分离培养P0小鼠海马DG区NSCs分化后自噬相关基因ATG3、ATG5、ATG7和Beclin-1 mRNA以及LC3-Ⅱ/Ⅰ蛋白表达水平被观察到均升高(P＜0.01),同时还观察到NSCs分化后FoxO3、FoxO4、FoxO6 mRNA的表达水平均增高(P＜0.01),其中转录因子FoxO4的mRNA和蛋白表达增高最为显著(P＜0.01).通过运用靶向FoxO4的siRNA转染NSCs后,发现NSCs自噬相关基因ATG3、ATG5、ATG7和Beclin-1 mRNA以及LC3-Ⅱ/Ⅰ蛋白表达水平均降低(P＜0.05),且NSCs中Tuj1表达受到显著抑制(P＜0.05).结论:FoxO4基因沉默降低了小鼠海马NSCs中自噬水平,并抑制其向神经元分化.
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