【摘 要】
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目的 通过原核表达获得大量脂肪新蛋白质My027,并在体外初步研究其生物活性.方法 RT-PCR法扩增出My027片段,插入原核表达载体pGEx-4T-2,构建质粒pGEX-My027.转化BL-21菌,IPTG
【机 构】
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上海交通大学附属第一人民医院内分泌科,上海市内分泌代谢病研究所,上海交通大学附属瑞金医院内分泌代谢病科
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目的 通过原核表达获得大量脂肪新蛋白质My027,并在体外初步研究其生物活性.方法 RT-PCR法扩增出My027片段,插入原核表达载体pGEx-4T-2,构建质粒pGEX-My027.转化BL-21菌,IPTG低温诱导表达融合蛋白,经亲和层析法获得融合蛋白,利用SDS-PAGE、Western印迹及质谱进行搭定.在还原性谷胱甘肽存在的条件下,将纯化得到的融合蛋白作用于乙二醛酶Ⅰ的底物甲基乙二醛,通过分光光度法榆测产物物乳酸谷胱甘肽的生成.结果 仓融合蛋白以水溶形式分泌于大肠埃希菌BL-21胞浆中,纯化后的目的蛋白 SDS-PAGE、Western印迹及质谱证实高效表达,氨基酸序列正确.结论 表人脂肪细胞新蛋白质My027在pGEX-4T-2原核表达载体中可获高效表达,所纯化蛋白具有类似于乙二醛酶Ⅰ的作用.
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