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目的
探讨Na+/H+交换蛋白1(NHE-1)反义表达载体(pNHE-1)对人肺癌细胞NHE-1基因的抑制作用及生物学效应.
方法实验细胞分为3组, A549- pNHE-1组(反义组)、A549空载体组(空载体组)、A549对照组(A549组).采用阳离子脂质体使pNHE-1转染人肺腺癌A549细胞株.采用半定量逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法测定3组细胞的NHE-1 mRNA表达水平;用荧光法测定3组细胞内pH(pHi)值;了解转染细胞增殖生长状况;用细胞凋亡原位检测法检测3组细胞凋亡率.
结果在转染细胞基因组DNA中扩增出外源真核表达载体的DNA片段,证明转染成功.半定量RT-PCR法证实反义组细胞的NHE-1 mRNA表达水平(0.42±0.06)显著低于A549组(0.71±0.08,P＜0.01)和空载体组(0.69±0.16,P＜0.01).A549组细胞在培养12、24和48 h后pHi值分别为7.150±0.004、7.140±0.007和7.120±0.008,反义组pHi值分别为6.990±0.005、6.840±0.005和6.750±0.005,两组差异均有极显著性(P<0.01).A549组、空载体组和反义组的细胞倍增时间分别为3.20、3.28和4.97 d,反义组细胞的增殖、生长明显慢于A549组及空载体组(P＜0.01).反义组细胞凋亡率为(24.50±3.62)%,显著高于A549组的(1.50±0.55)%和空载体组的(2.20±0.75)%(均P＜0.01).
结论pNHE-1可成功转染到A549细胞基因组中,并可抑制转染细胞NHE-1 mRNA的表达,通过降低Na+/H+交换活性,使肿瘤细胞pHi明显降低、细胞增殖生长速度明显减慢、凋亡率显著增高.