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目的
观察Pluronic F-127水凝胶的理化性质,并遴选最佳的浓度,探讨其作为骨髓间充质干细胞(BMSCs)载体的生物相容性。
方法制备10%、20%、30% (m/v)的Pluronic F-127水凝胶,分析其成胶性能及溶胀率,在扫描电镜(SEM)下观察不同浓度水凝胶的微观形态。不同浓度水凝胶包含BMSCs及转化生长因子(TGF-β1)后共培养7 d,经细胞计数试剂盒-8(CCK-8)定期检测不同载体内BMSCs增殖生长状况。筛选出较佳的Pluronic F-127浓度,加入诱导液对BMSCs进行多向诱导分化,分别进行油红-O及茜素红-S染色且根据染色结果评价细胞诱导分化的效果。
结果Pluronic F-127水凝胶的成胶时间与其浓度呈负相关,且浓度越高的初始成胶温度较低,更易成胶。Pluronic F-127水凝胶浓度较高,其微观结构较致密,相应的溶胀率较低。CCK-8结果证实20%的水凝胶与10%比较,对BMSCs增殖的抑制作用更大,第5天最为明显,20%组吸光度(A)值(0.302±0.045)显著低于10%组(0.571±0.081,t=5.120,P<0.05),而在凝胶载体中加入TGF-β1则对细胞的增殖有促进作用,第5天20%*组(加入TGF-β1)A值(0.454±0.034)明显高于20%组(0.302±0.045,t=6.088,P<0.05)。成脂及成骨诱导后可以看到有脂滴及钙化点成分着色。
结论20%浓度的Pluronic F-127可作为支持BMSCs增殖及分化的合适载体,且复合生长因子或诱导液会更有利于细胞进一步生长分化。