研究糖基化终末产物(AGEs)对人胰岛微血管内皮细胞(HIMVEC)黏附分子表达和白细胞黏附的影响。
方法HIMVEC细胞在200 mg/L的AGEs刺激后，用细胞基础的酶联免疫吸附法(ELISA)和Western blotting法检测细胞表面黏附分子的表达；并与BCECF标记的白细胞共培养检测与白细胞的黏附能力。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blotting分别检测HIMVEC细胞上AGEs受体(RAGE)、蛋白激酶Cβ(PKC β)和蛋白激酶A(PKA)的mRNA表达情况。随后给予PKC β抑制剂LY333531或PKA激活剂8-Br-cAMP，观察对HIMVEC黏附分子表达的影响及和白细胞黏附的影响。两组间比较采用t检验进行分析。
结果与对照组相比，AGEs处理后HIMVEC表达P选择素、E选择素和血管细胞黏附分子1(VCAM-1)均上调(分别为1.10±0.13比0.64±0.14，0.83±0.06比0.47±0.05，0.87±0.09比0.43±0.07，t＝4.93、9.40、7.61，均P<0.05)，并且与白细胞的黏附较对照组明显增加(54±4比23±3，t＝12.69，P<0.05)。与AGEs组比较，RAGE抗体组P选择素、E选择素和VCAM-1的表达明显降低，组间差异具有统计学意义(t＝5.69、6.89、5.43，均P<0.05)。RAGE抗体组白细胞黏附明显少于AGEs组(54±4比31±4，t＝8.22，P<0.05)。与对照组相比，AGEs处理HIMVEC 4 h和18 h，在mRNA水平和蛋白质水平均检测到RAGE和PKCβ的表达上调，但PKA的表达下调(t＝10.94、7.76、21.82、5.85、10.96、11.47，均P<0.05)。与AGEs组相比，在AGEs处理时给予PKCβ抑制剂LY333531或PKA激活剂8-Br-cAMP，均可降低HIMVEC上P选择素、E选择素和VCAM-1的表达水平(t＝7.60、6.60、6.25、11.58、4.08、3.47，均P<0.05)，并减少白细胞的黏附(t＝7.67、8.89,均P<0.05)。
结论AGEs通过RAGE受体上调PKCβ和下调PKA增加HIMVEC上黏附分子的表达，促进白细胞的黏附，可能是糖尿病状态下胰岛中白细胞浸润的机制之一。