【摘 要】
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目的 验证同源基因A10(hoxA10)对10号染色体缺失的磷酸酶、张力蛋白同源基因(pten)、磷脂酰肌醇-3-激酶(pi3k)和蛋白激酶B(Akt)信号通路的影响.方法 设计SD大鼠骨髓间充质干细胞hoxA10基因的短发夹RNA(shRNA)靶序列,并构建pLVSHG01-Rat HoxA10重组慢病毒.用敲低型慢病毒感染SD大鼠的骨髓间充质干细胞(BMSCs),将BMSCs分为感染组(感染hoxA10敲低型慢病毒)和空白对照组(未感染).用嘌呤霉素筛选出感染成功的细胞株后,以蛋白质印迹法检测感染后B
【机 构】
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广州中医药大学,第三临床医学院,广东 广州 510405;广州中医药大学,护理学院,广东 广州 510405;广州中医药大学第三附属医院 妇科,广东 广州510360
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目的 验证同源基因A10(hoxA10)对10号染色体缺失的磷酸酶、张力蛋白同源基因(pten)、磷脂酰肌醇-3-激酶(pi3k)和蛋白激酶B(Akt)信号通路的影响.方法 设计SD大鼠骨髓间充质干细胞hoxA10基因的短发夹RNA(shRNA)靶序列,并构建pLVSHG01-Rat HoxA10重组慢病毒.用敲低型慢病毒感染SD大鼠的骨髓间充质干细胞(BMSCs),将BMSCs分为感染组(感染hoxA10敲低型慢病毒)和空白对照组(未感染).用嘌呤霉素筛选出感染成功的细胞株后,以蛋白质印迹法检测感染后BMSCs中HoxA10蛋白表达,用实时荧光定量反转录-PCR法检测各组骨髓间充质干细胞中hoxA10、pten、pi3k和akt基因的表达水平.用双染流式细胞凋亡试剂盒检测各组细胞的凋亡率和周期.结果 成功构建了hoxA10低表达的SD大鼠骨髓间充质干细胞,空白对照组和感染组的hoxA10基因表达量分别为6.22±0.20和3.09±0.06;这2组的pten基因表达量分别为1.97±0.18和5.09±0.07;这2组的pi3k基因表达量分别为6.06±0.05和2.72±0.10;这2组的akt基因表达量分别为5.98±0.09和2.48±0.35.上述指标:空白对照组与感染组比较,差异均有统计学意义(均P<0.001).空白对照组的细胞凋亡率(18.88±1.71)％明显低于感染组(36.01±0.45)％,组间差异有统计学意义(P<0.05).结论 HoxA10基因能够负向调控pten/pi3 k/akt信号通路.
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