【摘 要】
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为研究一种快速高效的茶叶多酚氧化酶(polyphenol oxidase,PPO)制备方法,本试验采用三相分离法(three phase partitioning,TPP)获取茶叶PPO,并研究其酶学特性.结果表明,通过两次三相分离纯化后可获得酶比活力210.46 U/mg、纯化15.76倍、回收率8.04％的茶叶PPO,其最亲和底物为邻苯三酚(Km=6.82 mmol/L,Vmax=5.36×10?2 OD/min),最适反应温度和pH分别为45℃和pH5.5,在25℃和pH4.5～7.0时具有较好的稳
【机 构】
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江西农业大学农学院,江西南昌 330045
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为研究一种快速高效的茶叶多酚氧化酶(polyphenol oxidase,PPO)制备方法,本试验采用三相分离法(three phase partitioning,TPP)获取茶叶PPO,并研究其酶学特性.结果表明,通过两次三相分离纯化后可获得酶比活力210.46 U/mg、纯化15.76倍、回收率8.04％的茶叶PPO,其最亲和底物为邻苯三酚(Km=6.82 mmol/L,Vmax=5.36×10?2 OD/min),最适反应温度和pH分别为45℃和pH5.5,在25℃和pH4.5～7.0时具有较好的稳定性.对纯化后茶叶PPO抑制作用最显著的化合物为抗坏血酸(IC50=2.42±0.18 mmol/L),其次是草酸和EDTA,柠檬酸抑制效果最弱,而卤化物无显著影响(P>0.05).表明三相分离法能够较好的保留茶叶PPO活性,且操作简便、耗时短、成本低,有利于工业化应用.
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