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目的
预测并鉴定人感染H7N9禽流感病毒血凝素(HA)蛋白的线性B淋巴细胞抗原表位及H7亚型的特异性。
方法选取绍兴市人民医院提供的人感染H7N9患者不同时间的三份血清样本和一份健康对照血清样本, 采用TMHMM Sever v.2.0预测蛋白质胞外区, 采用DNAStar Lasergene’s Protean、BcePred和ABCpred预测其优势B淋巴细胞抗原表位,并用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)验证预测的B淋巴细胞抗原表位的免疫原性。使用Clustal X2.1软件将预测抗原表位与GenBank上H7N9和H1~H16亚型流感病毒HA蛋白的氨基酸序列进行多重序列比对以分析预测抗原表位的H7亚型特异性,采用Cn3D 4.3.1软件分析预测的线性B淋巴细胞抗原表位在H7N9禽流感病毒HA蛋白中的分布情况。
结果HA蛋白可能的B淋巴细胞表位位于胞外区N端的第172~183、363~380、452~472和第491~506四个区段。 ELISA结果表明,四个预测的B淋巴细胞表位均与已确诊患者血清发生阳性反应。多重序列比对结果发现第172~183和452~472区段与其他亚型氨基酸序列差异最大,可能具有更好的H7亚型特异性。HA蛋白的三维结构进一步证明预测的四个B淋巴细胞抗原表位均位于HA蛋白表面。
结论鉴定出了四个HA蛋白线性B淋巴细胞抗原表位,其中第172~183和452~472区段具有更好的H7亚型特异性,可作为新型疫苗表位设计和H7抗原和抗体的特异性检测的依据。