慢病毒载体介导端粒酶逆转录酶小干扰RNA治疗肝癌的实验研究

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目的 探讨慢病毒介导的端粒酶逆转录酶(hTERT)小干扰RNA(siRNA)对肝癌细胞生长的影响。方法 构建携带hTERT siRNA的慢病毒表达载体,在体外转染人肝癌HepG2细胞系,以MTr法测定细胞生长变化,半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测hTERT mRNA的表达。将转染hTERT siRNA的HepG2细胞,接种于裸鼠腋窝皮下,观察移植瘤生长情况。取移植瘤组织,常规HE染色,行组织学观察,应用原位末端标记(TUNEL)技术检测细胞凋亡情况。结果 hTERT siRNA转染HepG2细胞后,随着时问的延长,对细胞增殖的抑制作用逐渐增强,到第8天,于扰组细胞抑制率为57.5%,与对照组比较,差异有统计学意义(P〈0.01)。RT-PCR产物凝胶电泳图显示,hTERT siRNA转染后,肿瘤细胞的端粒酶活性明显下降。转染后72h,干扰组hTERT mRNA的表达水平为0.035±0.007,明显低于空载体对照组(0.151±0.016)和空白对照组(0.155±0.014,均P〈0.01)。转染细胞皮下接种后,干扰组的肿瘤生长速度明显慢于两个对照组,随着时间的延长,差异越来越明显。移植瘤组织常规HE染色显示,组织坏死增多,周围炎性细胞浸润。TUNEL检测结果显示,细胞凋亡增多,增殖减慢。结论 慢病毒介导的hTERT siRNA转染能明显抑制肝癌细胞的生长。

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