兔出血症病料中病毒核酸成分的分析鉴别

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将兔出血症病毒(RHDV)感染死亡兔肝反复冻融,分别经氯仿抽提,聚乙二醇(PEG)沉淀浓缩,蔗糖垫底超速离心,Sepharose4B柱层析及蔗糖密度梯度离心,得到纯化的RHDV。电镜观察,RHDV粒子无囊膜,大小为32~34nm。核酸展层法显示,病毒基因组核酸长度约为7.0kb。用苯酚抽提法从上述病毒悬液中提取的核酸,在琼脂糖凝胶电泳呈现2条主带;当以λDNA-HindⅢ消化物为分子量标准时,它们分别位于相当于20kb(A带)和2.0kb(B带)的位置。用DNAse、RNAse及S1核酸酶消化试验分析表明,A带是一种双股DNA,而日带为单股RNA。在Northernblot中只有B带可以与德国提供的RHDV-cDNA克隆探针发生杂交反应,而A带不与该探针显示任何反应。此外,用相同方法也可从临床健康兔肝得到在电泳中的表现与A带一致的核酸提取物。本研究表明,在我国流行的RHD病料中,出现的约7.0kb的单股RNA是RHDV病原特异的。
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