【摘 要】
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目的:探讨高浓度氟对人牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSCs)凋亡的影响.方法:从新鲜拔除的恒牙牙周膜中分离获得PDLSCs,分别用不同浓度的氟化钠(0～40 ppm F
【机 构】
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苏州市第九人民医院口腔科,江苏省口腔医院牙体牙髓病科
【基金项目】
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江苏省口腔疾病研究重点实验室开放课题(JSK-LOD-KF-1705),苏州市吴江区卫健委科教兴卫项目(wwk201705、wwk202008)。
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目的:探讨高浓度氟对人牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSCs)凋亡的影响.方法:从新鲜拔除的恒牙牙周膜中分离获得PDLSCs,分别用不同浓度的氟化钠(0～40 ppm F)处理细胞,CCK-8法检测细胞活力,Annexin V-PI染色及JC-1染色后,流式细胞仪分析、检测氟对PDLSCs细胞凋亡及线粒体膜电位的影响.H-E染色细胞爬片观察氟对细胞形态的影响,免疫荧光染色及共聚焦显微镜观察细胞色素C(cyt-c),cleaved-caspase-9、-3的表达.RT-PCR检测caspase-9和-3的mRNA蛋白表达水平.Western印迹法分析丝裂原活化蛋白激酶家族(MAPKs)中ERK、JNK、p36总蛋白及磷酸化蛋白的表达水平.采用SPSS 13.0软件包对数据进行统计学分析.结果:氟处理能抑制PDLSCs活力(CCK-8分析),诱导细胞凋亡(Annexin V-PI染色),其效应表现为浓度及时间依赖性.氟浓度≥10 ppm时,能明显诱导细胞线粒体膜电位去极化(JC-1染色).免疫荧光分析显示,氟暴露促进cyt-c从线粒体释放到胞质,促进cleaved-caspase-9及-3蛋白表达.RT-PCR同样证明,氟暴露上调caspase-9及-3的mRNA表达水平,呈浓度依赖性.Western印迹分析显示,氟能诱导MARK/ERK磷酸化激活,而JNK、p38磷酸化水平无显著变化,ERK特异性阻断剂U0126预处理能部分挽救PDLSCs的凋亡.结论:高浓度氟通过内源性线粒体凋亡通路诱导PDLSCs细胞凋亡,MARK/ERK磷酸化部分参与其凋亡机制.
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