【摘 要】
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目的 利用单细胞蛋白表达定量分析技术建立研究造血干细胞(HSC)异质性的方法.方法 将不表达绿色荧光蛋白(GFP)的小鼠HSC(HSC-GFP-)与表达绿色荧光蛋白的小鼠HSC(HSC-GFP+)按1
【机 构】
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中山大学中山医学院科研仪器管理中心,广东广州510080
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目的 利用单细胞蛋白表达定量分析技术建立研究造血干细胞(HSC)异质性的方法.方法 将不表达绿色荧光蛋白(GFP)的小鼠HSC(HSC-GFP-)与表达绿色荧光蛋白的小鼠HSC(HSC-GFP+)按1∶1比例混合,采用单细胞蛋白表达定量分析技术:通过标准孔径芯片捕获HSC单细胞,在单细胞蛋白质分离模块(Milo系统)进行细胞裂解、蛋白电泳及紫外照射激活芯片内交联物质;芯片中的蛋白与相应抗体发生免疫反应,再与荧光标记的二抗结合;最后通过双荧光通道扫描模块采集荧光信号成像、运用Scout软件分析每个细胞中表达β微管蛋白(β-tubulin)和GFP的蛋白条带吸光度值,得到表达蛋白的细胞数及细胞中蛋白水平表达分布以分析细胞异质性.通过表达GFP及β-tubulin的细胞数计算转染GFP的细胞得率,与流式细胞术检测结果相比对验证.结果 单细胞蛋白表达定量分析技术检测表达GFP的小鼠HSC比例为44.20％,流式细胞术检测结果为42.528％;细胞中GFP表达水平分布在(0.42～7.35)×105之间,表明存在细胞异质性.结论 单细胞蛋白表达定量分析技术可用于HSC异质性的检测.
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