【摘 要】
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目的构建人CTLA4-FasL融合蛋白真核表达载体,表达CTLA4-FasL融合蛋白,通过体外实验初步研究其生物学特性. 方法通过特异引物分别扩增出CLTA4和FasL胞外区的cDNA,将它们拼接后,克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+)中,体外表达纯化.Western blot分析CTLA4-FasL融合蛋白的抗原性.体外细胞结合试验研究其结合特异性配体作用.混合淋巴细胞反应研究其抑制免疫应答
【机 构】
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100083,北京大学医学部免疫系
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目的构建人CTLA4-FasL融合蛋白真核表达载体,表达CTLA4-FasL融合蛋白,通过体外实验初步研究其生物学特性. 方法通过特异引物分别扩增出CLTA4和FasL胞外区的cDNA,将它们拼接后,克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+)中,体外表达纯化.Western blot分析CTLA4-FasL融合蛋白的抗原性.体外细胞结合试验研究其结合特异性配体作用.混合淋巴细胞反应研究其抑制免疫应答的效应. 结果测序证实所扩增的PCR产物分别是CLTA4和FasL胞外区的cDNA,其序列与文献报道相符.成功构建了pcDNA3.1-CTLA4-FasL真核表达载体.Western blot分析结果显示,表达获得的蛋白具有CTLA4和FasL的抗原性.体外细胞结合试验显示,CTLA4-FasL融合蛋白可以分别与Jurkat细胞表面的Fas受体和Raji细胞表面的B7分子结合.混合淋巴细胞反应结果显示,该融合蛋白可以有效抑制异基因淋巴细胞的刺激作用及诱导淋巴细胞凋亡,并显示了显著的协同效应. 结论成功构建了CTLA4-FasL融合蛋白真核表达载体,体外表达并纯化了CTLA4-FasL融合蛋白,体外实验证实CTLA4-FasL融合蛋白是一个可以有效抑制免疫应答的双功能分子.
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