本试验旨在探讨鸡羽速基因型Hae Ⅲ酶切鉴定方法的分子基础。以羽型明确的6个品系(太行鸡、坝上长尾鸡、大午粉鸡、海兰灰鸡、海兰褐鸡、海兰灰祖代四系鸡)313份鸡基因组为模板,利用Hae Ⅲ酶切的RFLP试验进行羽速验证,并对ev21占位区(OS)和非占位区(US)共有序列以及OS区特有序列进行酶切试验。结果表明:1)Blast分析发现1 450bp为鸡ev21的US区域片段。海兰灰及其祖代四系和大午粉祖代的羽速基因型与HaeⅢ酶切结果完全一致,但太行慢羽公鸡、慢羽母鸡、坝上长尾慢羽公鸡和海兰褐慢羽鸡的一致率分别为40.0%、27.6%、28.6%和0.0%;2)太行鸡和坝上长尾鸡ev21的OS和US区共有序列538bp酶切鉴定结果与表型一致率达到92%以上,其他品系(除海兰褐快羽公鸡为0.0%)均为100.0%;3)鸡ev21的OS区特异序列1 440bp的扩增阳性率在太行慢羽公鸡、慢羽母鸡和快羽公鸡中的阳性率分别为94.1%、65.5%和0.0%,在海兰灰祖代鸡中分别为100.0%和0.0%,并且1 440片段不能被Hae Ⅲ切开。综合分析6个品系ev21的OS和US区结构特征,认为US区Hae Ⅲ酶切位点变异不能作为慢羽和内源病毒ev21的鉴定依据,而OS区的ev21插入与1 440bp序列Hae Ⅲ酶切位点的A→G突变和八碱基重复是紧密连锁的。