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摘要 [目的]研究广州市售水产品中副溶血弧菌和溶藻弧菌的耐药性情况。[方法]采用Kirby-Bauer纸片扩散法检测从水产品中分离的87株副溶血弧菌和118株溶藻弧菌对水产养殖业中常用的18种抗生素的耐药情况。[结果]水产品中的副溶血弧菌和溶藻弧菌均对万古霉素、克林霉素以及青霉素类抗生素有明显抗性，多重耐药比例达100%，溶藻弧菌的多重耐受现象较为突出。[结论] 广州市售水产品中的副溶血弧菌和溶藻弧菌具有多种抗生素抗性，且多重耐药情况突出。
关键词 副溶血弧菌；溶藻弧菌；耐药性；多重耐药
中图分类号 S948 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2017）28-0074-04
Abstract [Objective] To investigate the drug resistance of Vibrio parahemolytics and Vibrio alginolyticus in aquatic products from Guangzhou retail markets. [Method] KirbyBauer disk diffusion method was used to detect the antibiotic resistance of 87 isolates of V. parahemolytics and 118 isolates of V. alginolyticus in aquatic products to 18 kinds of antibiotics widely used in aquaculture industry. [Result] Both V. parahemolytics and V. alginolyticus were resistant to vancomycin， clindamycin and penicilins. All the isolates exhibited multidrug resistance， while V. alginolyticus isolates showed outstanding multiple antibiotic resistance. [Conclusion] V. parahemolytics and V. alginolyticus in aquatic products from Guangzhou retail markets were resistant to many kinds of antibiotics， they also exhibited complex multidrug resistance.
Key words Vibrio parahemolytics；Vibrio alginolyticus；Drug resistance；Multidrug resistance
副溶血弧菌是一种革兰氏阴性嗜盐细菌，主要分布于海水、海底沉積物以及鱼、虾、贝类等海产品中，不仅是水产养殖业的重要病原菌，而且是人类主要的食源性致病菌之一[1-3]。我国是副溶血弧菌引发食物中毒的高发地区，由该病原菌感染引发的急性肠胃炎占细菌性食物中毒的首位，在某些沿海城市比例高达60%以上[4-5]。溶藻弧菌虽然是水生环境中的优势菌种，同样会引起水生动物感染，但其对人类的致病性不如副溶血弧菌强，属于条件致病菌。鉴于溶藻弧菌的致病性弱于霍乱弧菌、创伤弧菌和副溶血弧菌等典型弧菌病原菌，临床症状相对较轻，一般不会导致死亡，且目前尚未出现溶藻弧菌大规模暴发的疫情，因此对其致病性和耐药性的研究也相对薄弱[6-8]。
目前，水产养殖业中抗生素的过度使用问题日益严重。用药种类广、剂量大、频次高等问题不仅会造成不良的生态学效应，药物残留及药物的选择压力致使病原菌对抗生素的敏感性下降甚至消失，而且增加了防治水产病害的难度，其耐药性甚至可能发生转移，对人体健康构成进一步的威胁[9-12]。笔者针对从广州市售水产品中分离的87株副溶血弧菌和118株溶藻弧菌，选取水产养殖业中常用的18种抗生素进行药敏试验，旨在研究广州市售水产品分离的副溶血弧菌和溶藻弧菌的耐药性情况，以期为水产养殖过程中抗生素的合理规范应用提供指导，为弧菌耐药基因的定位和耐药机制的研究以及水产品的安全性评估提供参考资料。
1 材料与方法
1.1 试验菌株
药敏性测定标准质控菌株大肠杆菌ATCC 25922，由广东省出入境检验检疫局检验检疫技术中心食品实验室微生物部提供。87株副溶血弧菌和118株溶藻弧菌来自广州地区多个肉菜市场售卖的水产品，品类涵盖花螺、花甲、青口、沙甲、白贝、大头蛤、沙蛤、鲍鱼、扇贝、海瓜子、蛏子和贵妃蚌。
1.2 培养基及药敏纸片
用于培养弧菌的特异性培养基TCBS和用于药敏性试验的培养基MHA均购自北京陆桥技术股份有限公司；用于弧菌液体培养的3% NaCl碱性蛋白胨水购自青岛海博生物技术有限公司。药敏纸片的选择按照美国临床实验室标准化研究所（Clinical and laboratory standards institute，CLSI）推荐的肠杆菌药敏试验抗生素选择原则，结合我国水产养殖业抗生素使用特点，选择使用的18种抗生素及其剂量见表1。18种抗生素的Oxoid药敏纸片，购自华粤瑞科科学器材有限公司。
1.3 药敏试验
在TCBS培养基上活化副溶血弧菌和溶藻弧菌后，挑取单菌落接种于3% NaCl的TSB培养基中37 ℃过夜培养后，用生理盐水稀释菌液至浓度为0.5麦氏浊度，以无菌棉拭子蘸取稀释后的菌液，均匀涂布于4 mm厚的MHA平板上，操作过程严格按照美国临床实验室标准化委员会（Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI）推荐的Kirby-Bauer纸片扩散法[13]进行。37 ℃下倒置培养16～18 h后，测量抑菌圈直径，再根据CLSI标准判定为耐药（resistant）、中介（intermediate）以及敏感（sensitive）。
关键词 副溶血弧菌；溶藻弧菌；耐药性；多重耐药
中图分类号 S948 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2017）28-0074-04
Abstract [Objective] To investigate the drug resistance of Vibrio parahemolytics and Vibrio alginolyticus in aquatic products from Guangzhou retail markets. [Method] KirbyBauer disk diffusion method was used to detect the antibiotic resistance of 87 isolates of V. parahemolytics and 118 isolates of V. alginolyticus in aquatic products to 18 kinds of antibiotics widely used in aquaculture industry. [Result] Both V. parahemolytics and V. alginolyticus were resistant to vancomycin， clindamycin and penicilins. All the isolates exhibited multidrug resistance， while V. alginolyticus isolates showed outstanding multiple antibiotic resistance. [Conclusion] V. parahemolytics and V. alginolyticus in aquatic products from Guangzhou retail markets were resistant to many kinds of antibiotics， they also exhibited complex multidrug resistance.
Key words Vibrio parahemolytics；Vibrio alginolyticus；Drug resistance；Multidrug resistance
副溶血弧菌是一种革兰氏阴性嗜盐细菌，主要分布于海水、海底沉積物以及鱼、虾、贝类等海产品中，不仅是水产养殖业的重要病原菌，而且是人类主要的食源性致病菌之一[1-3]。我国是副溶血弧菌引发食物中毒的高发地区，由该病原菌感染引发的急性肠胃炎占细菌性食物中毒的首位，在某些沿海城市比例高达60%以上[4-5]。溶藻弧菌虽然是水生环境中的优势菌种，同样会引起水生动物感染，但其对人类的致病性不如副溶血弧菌强，属于条件致病菌。鉴于溶藻弧菌的致病性弱于霍乱弧菌、创伤弧菌和副溶血弧菌等典型弧菌病原菌，临床症状相对较轻，一般不会导致死亡，且目前尚未出现溶藻弧菌大规模暴发的疫情，因此对其致病性和耐药性的研究也相对薄弱[6-8]。
目前，水产养殖业中抗生素的过度使用问题日益严重。用药种类广、剂量大、频次高等问题不仅会造成不良的生态学效应，药物残留及药物的选择压力致使病原菌对抗生素的敏感性下降甚至消失，而且增加了防治水产病害的难度，其耐药性甚至可能发生转移，对人体健康构成进一步的威胁[9-12]。笔者针对从广州市售水产品中分离的87株副溶血弧菌和118株溶藻弧菌，选取水产养殖业中常用的18种抗生素进行药敏试验，旨在研究广州市售水产品分离的副溶血弧菌和溶藻弧菌的耐药性情况，以期为水产养殖过程中抗生素的合理规范应用提供指导，为弧菌耐药基因的定位和耐药机制的研究以及水产品的安全性评估提供参考资料。
1 材料与方法
1.1 试验菌株
药敏性测定标准质控菌株大肠杆菌ATCC 25922，由广东省出入境检验检疫局检验检疫技术中心食品实验室微生物部提供。87株副溶血弧菌和118株溶藻弧菌来自广州地区多个肉菜市场售卖的水产品，品类涵盖花螺、花甲、青口、沙甲、白贝、大头蛤、沙蛤、鲍鱼、扇贝、海瓜子、蛏子和贵妃蚌。
1.2 培养基及药敏纸片
用于培养弧菌的特异性培养基TCBS和用于药敏性试验的培养基MHA均购自北京陆桥技术股份有限公司；用于弧菌液体培养的3% NaCl碱性蛋白胨水购自青岛海博生物技术有限公司。药敏纸片的选择按照美国临床实验室标准化研究所（Clinical and laboratory standards institute，CLSI）推荐的肠杆菌药敏试验抗生素选择原则，结合我国水产养殖业抗生素使用特点，选择使用的18种抗生素及其剂量见表1。18种抗生素的Oxoid药敏纸片，购自华粤瑞科科学器材有限公司。
1.3 药敏试验
在TCBS培养基上活化副溶血弧菌和溶藻弧菌后，挑取单菌落接种于3% NaCl的TSB培养基中37 ℃过夜培养后，用生理盐水稀释菌液至浓度为0.5麦氏浊度，以无菌棉拭子蘸取稀释后的菌液，均匀涂布于4 mm厚的MHA平板上，操作过程严格按照美国临床实验室标准化委员会（Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI）推荐的Kirby-Bauer纸片扩散法[13]进行。37 ℃下倒置培养16～18 h后，测量抑菌圈直径，再根据CLSI标准判定为耐药（resistant）、中介（intermediate）以及敏感（sensitive）。