目的建立人非小细胞肺癌(NSCLC)奥希替尼获得性耐药细胞株PC-9/ZDOR,探讨其耐药机制及耐药后化疗敏感性。方法体外采用逐步递增奥希替尼剂量诱导已对吉非替尼产生获得性耐药的NSCLC细胞株PC-9/ZD建立奥希替尼耐药细胞株PC-9/ZDOR;二代测序(NGS)检测EGFR基因突变;CCK-8法检测细胞生长,通过耐药指数(RI)确定化疗药物敏感性;Western blot法检测EGFR及其信号蛋白表达。结果 (1)CCK-8法测得PC-9/ZDOR的RI为44,显示PC-9/ZDOR为奥希替尼耐药细胞。(2)NGS显示:PC-9/ZDOR的EGFR19及20外显子T790M突变消失,也无EGFR扩增。(3)Western blot显示:与PC-9/ZD细胞相比,PC-9/ZDOR细胞株EGFR及其磷酸化蛋白表达显著减少(P <0.05),p-ERK和p-AKT表达水平下降(P <0.05)。(4)PC-9/ZDOR细胞株对化疗药物多西他赛、吉西他滨、紫杉醇敏感性较PC-9/ZD细胞增加(P <0.05),而对培美曲塞、顺铂敏感性较PC-9/ZD细胞无明显差别(P> 0.05)。结论 PC-9/ZDOR为吉非替尼耐药后奥希替尼获得性耐药NSCLC细胞,EGFR基因突变消失和(或)EGFR及其磷酸化蛋白表达显著减少、EGFR信号传导蛋白减少可能是耐药机制之一,耐药后细胞株对紫杉类、吉西他滨化疗药物敏感性增加。