【摘 要】
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利用AcMNPV穿梭载体Bac-to-Bac系统构建了分别由杆状病毒极早期基因iel启动子和极晚期基因ph启动子控制的AcMNPV组织蛋白酶基因v-cath表达的两种双拷贝重组杆状病毒.用这两种
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利用AcMNPV穿梭载体Bac-to-Bac系统构建了分别由杆状病毒极早期基因iel启动子和极晚期基因ph启动子控制的AcMNPV组织蛋白酶基因v-cath表达的两种双拷贝重组杆状病毒.用这两种重组病毒感染细胞和幼虫,研究了不同时相v-cath基因的表达及细胞和幼虫死亡的机理.SDS-PAGE和Western blot分析结果表明:在感染Sf9细胞12 h后(12 h pi),重组病毒dciAcMNPV的晚期基因v-cath在早期基因iel启动子驱动下得到表达.到48 h pi,重组病毒dcdAcMNPV中v-cath基因在晚期和极晚期ph启动子驱动下高水平表达.阴性对照v-cath缺陷型病毒(ncAcMNPV)则没有V-CATH蛋白表达.毒力实验表明它们的杀虫活性大小依次为dcdAcMNPV＞dciAcMNPV＞野生型AcMNPV＞ncAcMNPV.根据双拷贝重组病毒的毒力和幼虫的死亡特征,AcMNPV的v-cath基因是一个毒力辅助因子和与虫体液化死亡有关的基因.所构建的重组病毒dcdAcMNPV由于是通过改变病毒自身基因的表达时相和拷贝数而提高了杀虫效率,因而不存在田间释放时的安全性隐患,有望成为一种新型的病毒杀虫剂.
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