【摘 要】
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目的克隆并表达大肠杆菌肉碱脱水酶基因.方法用聚合酶链反应(PCR)从大肠杆菌K12s中扩增大肠杆菌肉碱脱水酶基因caiB,测定其DNA序列,将caiB基因重组到T7启动子控制下的表达载
【机 构】
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华东理工大学生物化学研究所,中国科学院上海生物化学研究所
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目的克隆并表达大肠杆菌肉碱脱水酶基因.方法用聚合酶链反应(PCR)从大肠杆菌K12s中扩增大肠杆菌肉碱脱水酶基因caiB,测定其DNA序列,将caiB基因重组到T7启动子控制下的表达载体pET-28a(+)中,构建表达质粒pETCaiB,转化大肠杆菌BL21(DE3),用1mmol/L异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导表达.结果克隆得到的肉碱脱水酶编码基因caiB长度为1221bp,与文献报道值相比,DNA序列有26个不同,氨基酸序列只有一个不同,即302位的丙氨酸变为苏氨酸.重组菌经IPTG诱导,可高效表达,SDS-PAGE分析表达蛋白相对分子质量约43000,表达产物含量占菌体总蛋白45%以上.结论得到了高效表达肉碱脱水酶的重组菌,为制备L-肉碱创造了条件.
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