目的 建立多色荧光丙型肝炎基因分型检测方法.方法 针对HCV 5′NCR 区特异性基因设计一对通用引物和Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ/Ⅳ型特异性探针,Ⅰ型和Ⅲ型探针标记FAM 荧光染料,Ⅱ/Ⅳ型标记VIC 荧光染料,分别建立Ⅰ/Ⅱ型和Ⅲ/Ⅳ型两管双色荧光PCR 扩增系统.分别采用测序和本研究方法对97 份丙型肝炎阳性血清进行分型,比较两种方法分型结果的一致性,并对双色荧光法检测的2889 例HCV 分型结果进行分析.结果 在97 份丙型肝炎阳性血清中,双色荧光法分出Ⅰ型65例(67.0%),Ⅱ型25 例(25.8%),Ⅲ型2 例(2.1%),Ⅰ/Ⅱ混合型3 例(3.1%),有2 例HCV RNA 定量为(1 ～3) ×103 IU/ml 弱阳性标本未分出型;测序法分出Ⅰ型61 例(62.9%),Ⅱ型24 例(24.7%),Ⅲ型2 例(2.1%),Ⅰ/Ⅱ混合型2 例(2.1%),有8 例HCV RNA 定量结果为(1 ～5) ×103 IU/ml 的阳性标本测序法未分出型,有1 例Ⅰ/Ⅱ混合型标本测序无法判断,而荧光法分型明确.我院采用本研究建立的方法检测2889 例临床丙型肝炎标本,2268 份分出基因型,其中Ⅰ型1545 例(68.1%),Ⅱ型702 例(31.0%),Ⅰ/Ⅱ混合型18 例(0.8%),Ⅲ型3 例(0.1%),高HCV 载量血清全部涵盖在Ⅰ/Ⅱ/Ⅲ型中,未发现Ⅳ型和其他型的病例.结论 本研究建立的双色荧光HCV 基因分型的方法具有良好的敏感性、特异性、可重复性且省时省力,由于近99%的HCV 阳性血清为Ⅰ/Ⅱ型,所以临床可选择Ⅰ/Ⅱ型试剂进行常规检测,对高病毒载量而非Ⅰ/Ⅱ型的标本可采用Ⅲ/Ⅳ型试剂进一步分型明确.