SV40T抗原真核表达载体的构建及其在食管癌细胞EC9706中的表达鉴定

来源 :山东医药 | 被引量 : 0次 | 上传用户：youluxihua

【摘要】

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构建胃壁细胞特异性表达载体pcDNA3．1（-）／HKSV和非特异性表达载体pcDNA3．1（-）／SV，行酶切及测序鉴定。用脂质体转染法将构建的载体导入食管癌细胞EC9706细胞株，RT—PCR法检测SV40T抗原基

【作者】

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陈辉杜春艳谢庆瑞马慧洁张钦宪

【机构】

：

郑州大学基础医学院,郑州大学实验动物中心,漯河市第一人民医院

【出处】

：

山东医药

【发表日期】

：

2008年26期

【关键词】

：

SV40T抗原转染真核载体

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构建胃壁细胞特异性表达载体pcDNA3．1（-）／HKSV和非特异性表达载体pcDNA3．1（-）／SV，行酶切及测序鉴定。用脂质体转染法将构建的载体导入食管癌细胞EC9706细胞株，RT—PCR法检测SV40T抗原基因的表达，免疫组化法检测蛋白表达情况。结果限制性内切酶分析与测序结果示H^＋／K^＋ATP酶β亚基启动子与SV40T基因成功构建于pcDNA3．1（-）真核表达载体中；转染细胞提取基因组DNA及总RNA，分别经PCR和RTPCR反应扩增出618bp和272bp的特异性片段，非特异性表达载体p

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