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目的
探讨Klotho蛋白对高磷诱导的大鼠血管平滑肌细胞成骨样转化、钙化作用的影响及其可能的机制。
方法体外培养大鼠血管平滑肌细胞，被分为5组：对照组；钙化组：10 mmol/L β甘油磷酸诱导平滑肌细胞钙化；钙化＋LiCl组：在钙化组基础上加入5 mmol/L的LiCl；钙化＋Klotho组：在钙化培养基中加入不同浓度的重组小鼠Klotho蛋白(rm Klotho)；钙化＋Klotho+LiCl组：在钙化＋Klotho组基础上加入Wnt/β-catenin通路激动剂氯化锂(LiCl)干预。12 d后，茜素红染色法观察细胞的钙盐沉积，分光光度计法测定细胞外基质钙含量。免疫荧光法检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达。Western印迹法检测骨形态形成蛋白2(BMP2)、Runt相关转录因子2(Runx2)、β连环蛋白(β-catenin)的表达。
结果β甘油磷酸诱导大鼠血管平滑肌细胞12 d后，茜素红染色结果显示钙盐沉积明显；细胞外基质钙含量增加。与对照组相比，钙化组细胞BMP2，Runx2，β-catenin表达上调，α-SMA表达下调(均P <0.05)。与钙化组相比，钙化＋Klotho组细胞钙化程度减轻，BMP2，Runx2，β-catenin表达下调，α-SMA表达上调(均P< 0.01)。与钙化＋Klotho组相比，钙化＋Klotho+LiCl组细胞BMP2、Runx2及β-catenin表达上调(均P< 0.01)。
结论Klotho蛋白可减轻高磷诱导的血管平滑肌细胞的成骨细胞转化、钙化作用，其机制可能与Wnt/β-catenin通路的抑制有关。