【摘 要】
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以狭叶坡垒DNA为模板,利用正交试验分别对ISSR-PCR反应的MgCl2浓度、dNTPs浓度、Taq聚合酶浓度、引物浓度、模板DNA浓度进行了优化,并通过梯度PCR确定最佳退火温度和循环次数
【机 构】
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广西壮族自治区中国科学院广西植物研究所
【基金项目】
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植物园迁地保护植物编目及信息标准化(2009FY120200)
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以狭叶坡垒DNA为模板,利用正交试验分别对ISSR-PCR反应的MgCl2浓度、dNTPs浓度、Taq聚合酶浓度、引物浓度、模板DNA浓度进行了优化,并通过梯度PCR确定最佳退火温度和循环次数,最终确定狭叶坡垒最佳反应体系及扩增条件为:25μL体系中1×PCRbuffer,2mmol/LMgCl2,0.25mmol/LdNTPs,0.04U/μLTaq聚合酶,0.2μmol/L引物,4ng/μLDNA模板;最佳扩增程序为:94℃预变性5min;94℃变性45s,53℃退火45s,72℃延伸1.5min,共35个循环;72℃最后延伸7min。
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