【摘 要】
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建立了一种基于电喷雾电离质谱的丙酮稳定同位素标记对N-糖链进行相对定量的研究方法.与传统的PNGase F酶水解N-糖链的方法不同,采用非特异性蛋白酶Pronase E对N-糖蛋白进行
【机 构】
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西北大学生命科学学院西部资源生物与现代生物技术教育部重点实验室,咸阳师范学院化学与化工学院,
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建立了一种基于电喷雾电离质谱的丙酮稳定同位素标记对N-糖链进行相对定量的研究方法.与传统的PNGase F酶水解N-糖链的方法不同,采用非特异性蛋白酶Pronase E对N-糖蛋白进行处理,使N-糖蛋白被酶解为带有一个氨基酸的糖氨酸(Glycan-Asn),为N-糖链引入了一个氨基活性基团,然后用丙酮对氨基进行标记.用d0/d6丙酮对Ribo B标准糖蛋白的Pronase E酶解产物进行标记,考察了4对d0/d6丙酮标记的Glycan-Asn(Man5~Man8-Asn)在电喷雾电离质谱中的线性、动态范围以及重现性.结果表明,在10倍动态范围内,相对定量方法有良好的线性关系(R=0.9981)和重现性(CV<8.7%).并将建立的方法应用于不同含量的鸡卵清白蛋白中,进一步验证了该方法的可行性.研究结果表明,该方法能准确分析样品中N-糖链的含量,对不同样品中N-糖链进行相对定量.该方法成本低廉,后处理方法简单方便,适于微量样品通量化分析,对差异糖组的研究有一定的意义.
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