【摘 要】
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利用大肠杆菌原核表达并纯化恶性疟原虫3D7株裂殖子新型蛋白质PF3 D7_0811600,免疫家兔制备特异性多克隆抗体,通过对虫体天然蛋白的识别,分析PF3D7_0811600在虫体内的表达.采
【机 构】
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吉林大学人兽共患病研究所,人兽共患病教育部重点实验室,长春130062
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利用大肠杆菌原核表达并纯化恶性疟原虫3D7株裂殖子新型蛋白质PF3 D7_0811600,免疫家兔制备特异性多克隆抗体,通过对虫体天然蛋白的识别,分析PF3D7_0811600在虫体内的表达.采用PCR技术从恶性疟原虫3D7株总DNA中获得PF3 D7_0811600基因的目的片段,连接到pMD18-T克隆载体,得到的克隆质粒经EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切后,构建重组原核表达质粒pET-PF3D7_0811600和pGEX-PF3D7_0811600,通过优化表达条件,分别在大肠杆菌中得到高效表达,并用亲和层析柱纯化目的蛋白质.用纯化的His标签重组蛋白质免疫家兔,用Western Blot方法检测制备的特异性多克隆抗体.结果表明:成功纯化并获得重组蛋白质,用间接ELISA方法检测多抗效价达到1∶16000,用Western Blot检测结果表明制备的多克隆抗体具有良好的特异性,能够识别虫体天然蛋白.恶性疟原虫3D7株裂殖子新型蛋白质PF3D7_0811600在虫体晚期表达,说明该蛋白在虫体发育的晚期发挥重要作用,猜测其可能与裂殖子入侵宿主红细胞有关.
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