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目的
筛选并鉴定致病性问号钩端螺旋体(简称钩体)外膜蛋白Loa22优势T细胞和B细胞(T/B)联合抗原表位及其免疫原性。
方法采用PCR检测我国流行的8群8型株问号钩体loa22基因，T-A克隆后测序。构建问号钩体黄疸出血群赖型赖株loa22基因原核表达系统。Ni-NTA亲和层析法提纯表达的目的重组蛋白rLoa22并制备其兔抗血清及其IgG。采用生物信息学软件预测Loa22的T-B联合抗原表位。采用噬菌体展示联合Western blot法、ELISA分别检测重组噬菌体PⅢ蛋白展示的T-B联合表位肽和人工合成T-B联合表位肽的免疫原性。采用MTS法和ELISA分别检测T-B联合表位肽诱导T细胞活化及其分泌IL-2、IL-4和IFN-γ情况。
结果所有受检的致病性钩体株均能检出loa22基因，其核苷酸和氨基酸序列相似性高达85.5%～99.8%和93.9%～99.5%。所构建的loa22基因原核表达系统能高效表达rLoa22。Loa22-77、Loa22-90、Loa22-125和Loa22-157这4个T-B联合抗原表位中，仅有Loa22-90显示了很强的Western blot阳性条带。Loa22-90能有效诱导CD4＋T细胞增殖及IL-2(Th1)和IL-4(Th2)水平显著升高(P<0.05)。
结论Loa22是问号钩体序列保守的属特异性外膜蛋白抗原，其优势T-B联合抗原表位为Loa22-90，该表位可作为钩端螺旋体多抗原肽疫苗的候选表位。