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根据K5蛋白(Pro451-Ala541)的结构特征和二硫键分布特点,设计K5的两个缺失突变体K5mut1(Cys461-Cys540,保留K5 kfingle环3个完整二硫键但去除N端和C端多余氨基酸)和K5 mut2(Cys482-Cys535,打开kringle环,只保留2个二硫键).以野生型人纤溶酶原K5 cDNA为模板,用PCR方法得到编码缺失突变体的DNA片段,定向克隆入pET22b(+)质粒载体,重组体转化进大肠杆菌BL21(DE3),诱导表达,产物经亲和层析和高浓度甘油透析纯化后进行鉴定和