【摘 要】
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目的 利用大肠杆菌原核表达系统表达并纯化肠道病毒71型( EV71) VP1蛋白,并对重组蛋白功能进行初步鉴定.方法 PCR扩增EV71 VP1全长基因,在测序正确的基础上,将其插入表达载体
【机 构】
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江苏省疾病预防控制中心,南京医科大学公共卫生学院,南京农业大学兽医学院
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目的 利用大肠杆菌原核表达系统表达并纯化肠道病毒71型( EV71) VP1蛋白,并对重组蛋白功能进行初步鉴定.方法 PCR扩增EV71 VP1全长基因,在测序正确的基础上,将其插入表达载体pET28a(+),构建表达质粒pET28a(+)/VP1,转化表达菌BL21 (DE3),IPTG诱导表达,利用Ni2+亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,经ELISA和Western Blot,验证EV71 VP1的抗原性.结果 成功构建pET28a(+ )/VP1重组质粒,经大肠杆菌表达、纯化获得分子量约为43kDa的融合蛋白,经ELISA和Western Blot,结果显示该蛋白有良好的抗原性.结论 实现了肠道病毒71型VP1蛋白的原核高效表达,为肠道病毒71型诊断试剂和疫苗的研究奠定基础.
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