【摘 要】
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目的 构建人eIF5A基因的融合表达载体并在大肠杆菌中诱导表达pGEX-4T-1-eIF5A融合蛋白.方法 以pCMV6-XL4-eIF5A作为模板,经PCR技术扩增目的片段,将获得的目的片段重组到原核
【机 构】
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温州医学院附属第一医院皮肤科、温州医学院皮肤性病研究所,中国人民解放军第三军医大学大坪医院野战外科研究所一室、创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室
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目的 构建人eIF5A基因的融合表达载体并在大肠杆菌中诱导表达pGEX-4T-1-eIF5A融合蛋白.方法 以pCMV6-XL4-eIF5A作为模板,经PCR技术扩增目的片段,将获得的目的片段重组到原核表达载体pGEX-4T-1上,经酶切鉴定、DNA测序检测插入序列的正确性.将测序正确的重组表达质粒pGEX-4T-1-eIF5A转化到E.coli BL21内,经IPTG诱导后,GST pull-down后SDS-PAGE电泳分析以及Westernblot检测人eIF5A的表达.结果 成功构建重组表达质粒pGEX-4T-1-eIF5A,经DNA测序证实插入序列与设计完全一致,GST pull-down后电泳分析以及Western blot结果说明大肠杆菌BL21诱导后表达出人eIF5A的glutathione S-transferase (GST)融合蛋白.功能研究初步证明重组eIF5A在细胞增殖过程中发挥重要作用.结论 构建成功的重组原核表达载体能在E.coli BL21内表达eIF5A的GST融合蛋白,为进一步研究人eIF5A蛋白的结构和生理功能如促进创伤修复提供帮助.
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