【摘 要】
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目的 观察长链非编码RNA(lncRNA)生长停滞特异性转录本5(GAS5)对骨髓间充质干细胞(BMSCs)软骨分化的影响,并探讨其机制是否与Notch通路有关.方法 分离、培养大鼠BMSCs,并经倒相差显微镜观察细胞形态及流式细胞仪检测表面标志物表达鉴定证实.将第3代BMSCs分为对照组、p-EGFP-C1组(转染p-EGFP-C1空载体质粒)、p-EGFP-C1-lncRNA GAS5组(转染p-EGFP-C1-lncRNA GAS5过表达质粒)、p-EGFP-C1-lncRNA GAS5+DAPT组
【机 构】
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湖南医药学院第一附属医院关节运动医学科,湖南怀化418000
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目的 观察长链非编码RNA(lncRNA)生长停滞特异性转录本5(GAS5)对骨髓间充质干细胞(BMSCs)软骨分化的影响,并探讨其机制是否与Notch通路有关.方法 分离、培养大鼠BMSCs,并经倒相差显微镜观察细胞形态及流式细胞仪检测表面标志物表达鉴定证实.将第3代BMSCs分为对照组、p-EGFP-C1组(转染p-EGFP-C1空载体质粒)、p-EGFP-C1-lncRNA GAS5组(转染p-EGFP-C1-lncRNA GAS5过表达质粒)、p-EGFP-C1-lncRNA GAS5+DAPT组[转染p-EGFP-C1-lncRNA GAS5过表达质粒+100 ng/mL Notch信号通路特异性阻断剂2,4-二氨基-5-苯噻唑(DAPT)],采用qRT-PCR法检测各组细胞lncRNA GAS5表达.各组细胞进行软骨分化诱导,HE染色观察细胞形态及数量,免疫细胞化学法检测Ⅱ型胶原纤维α1(COL2a1)、蛋白聚糖(Aggrecan)阳性表达率,Western blotting法检测Notch1和兔抗Split多毛增强子1(Hes-1)蛋白表达.结果 p-EGFP-C1-lncRNA GAS5组、p-EGFP-C1-lncRNA GAS5+DAPT组细胞lncRNA GAS5相对表达量均明显高于对照组、p-EGFP-C1组(P均<0.05).各组细胞均呈软骨细胞形态改变,即呈三角或多角形,细胞核为蓝紫色,细胞质和细胞外基质为红色,成团生长;p-EGFP-C1-lncRNA GAS5组与p-EGFP-C1-lncRNA GAS5+DAPT组软骨细胞数量明显多于对照组和p-EGFP-C1组,以p-EGFP-C1-lncRNA GAS5+DAPT组软骨细胞数量最多.与对照组及p-EGFP-C1组比较,p-EGFP-C1-lncRNA GAS5组及p-EGFP-C1-lncRNA GAS5+DAPT组细胞COL2a1、Aggrecan阳性表达率均升高,Notch1、Hes-1蛋白相对表达量均降低,且p-EGFP-C1-lncRNA GAS5+DAPT组变化更明显(P均<0.05).结论 lncRNA GAS5可通过抑制Notch通路激活来促进BMSCs的软骨分化.
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