【摘 要】
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构建了重组双功能水蛭素(Recombinant-RGD-Hirudin、r-RGD-Hirudin)cDNA的表达质粒RGD-Hirudin．pPIC9K，转化入毕赤酵母中，经筛选得到高表达的阳性克隆。种子菌经过3d发酵培养，其
【基金项目】
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上海市现代生物与新药发展基金 (No .2 0 0 14 3 192 0 2 )~~
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构建了重组双功能水蛭素(Recombinant-RGD-Hirudin、r-RGD-Hirudin)cDNA的表达质粒RGD-Hirudin．pPIC9K，转化入毕赤酵母中，经筛选得到高表达的阳性克隆。种子菌经过3d发酵培养，其培养液上清经超滤浓缩、凝胶过滤层析和离子交换层析后，得到纯度大于97％、比活性为12000ATU／mg的r-RGD-Hirudin，回收率大于60％，发酵产率为1g／L。纯化后的r-RGD-Hirudin经过还原SDS-PAGE，抗凝血酶活力分析、抗血小板聚集分析、质谱分析及等电聚
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