【摘 要】
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目的：明确宫颈癌HeLa细胞对环鸟苷酸依赖性蛋白激酶（PKG）抑制剂KT-5823的敏感性，探究KT-5823对HeLa细胞活力、凋亡和自噬的影响及机制。方法：使用不同浓度的KT-5823干预HeLa细胞24 h,CCK-8、免疫印迹试验分别测定细胞活力、PKG1表达水平，进而确定后续药物刺激浓度。将HeLa细胞分为两组，即DMSO组（对照组）和KT-5823组（实验组），流式细胞术检测细胞凋亡，
【基金项目】
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国家自然科学基金青年科学基金项目（81602403）； 天津市医学重点学科（专科）建设项目（TJYXZDXK-015A）；
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目的：明确宫颈癌HeLa细胞对环鸟苷酸依赖性蛋白激酶（PKG）抑制剂KT-5823的敏感性，探究KT-5823对HeLa细胞活力、凋亡和自噬的影响及机制。方法：使用不同浓度的KT-5823干预HeLa细胞24 h,CCK-8、免疫印迹试验分别测定细胞活力、PKG1表达水平，进而确定后续药物刺激浓度。将HeLa细胞分为两组，即DMSO组（对照组）和KT-5823组（实验组），流式细胞术检测细胞凋亡，GFP-LC3B荧光斑点实验检测自噬斑点形成数量，实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测PKG1、微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ（LC3Ⅱ）、Beclin1 mRNA的表达水平，免疫印迹试验检测PKG1、自噬相关蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin1、自噬相关通路蛋白蛋白激酶B（Akt）、磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（p-mTOR）、凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤2家族蛋白（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3（Caspase 3）蛋白的表达水平。增加自噬抑制剂SBI-0206965组观察自噬在此过程中的作用。结果：与对照组相比，实验组在3～100μmol/L刺激浓度下均可导致HeLa细胞活力降低（t=10.23～14.83，均P＜0.05）,PKG1蛋白表达水平逐渐降低（t=10.01～14.17，均P＜0.05）。最终选取3μmol/L为刺激浓度，用于后续研究。与对照组相比，细胞凋亡增加（t=10.78,P=0.004），荧光自噬斑点数量增加（t=10.12,P=0.000 5）,PKG1 mRNA、蛋白的表达水平降低（t=13.56,P=0.000 2;t=5.461,P=0.005 5）、LC3Ⅱ、Beclin1 m RNA（t=8.359,P=0.001 1;t=5.782,P=0.004 4）、LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin1蛋白（t=6.924,P=0.002 3;t=11.84,P=0.000 3）的表达水平增加，p-Akt/Akt（t=5.194,P=0.006 5）、p-mTOR/mTOR（t=12.78,P=0.000 2）、Bcl-2/Bax（t=13.79,P=0.000 2）的比值降低，Caspase 3表达增加（t=9.341,P=0.000 7）。与实验组相比，30、50、70、100μmol/L自噬抑制剂SBI-0206965组可增加细胞凋亡（t=7.616,P=0.001 6;t=15.43,P=0.000 1;t=11.01,P=0.000 4;t=15.39,P=0.000 1）。结论：PKG抑制剂KT-5823可有效抑制HeLa细胞增殖、促进细胞凋亡，同时可抑制Akt-mTOR通路诱导细胞发生自噬，且KT-5823诱导的自噬在此过程中起保护性作用，PKG可成为宫颈癌临床治疗的新靶点。
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